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蛋白純化試劑.產(chǎn)品介紹,DextrinBeads是一種純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)標(biāo)簽蛋白的親和層析介質(zhì),具體性能見表1。MBP可促進(jìn)連接蛋白的正確折疊,增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性,尤其是真**白。DextrinBeads可以一步純化MBP融合蛋白,結(jié)合的融合蛋白可以用10mM麥芽糖進(jìn)行溫和洗脫,保護(hù)了標(biāo)簽蛋白的活性。如果要去除MBP融合部分可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。問題及解決方案問題原因分析:柱子反壓過高填料被堵塞按照第3部分進(jìn)行樹脂清洗。裂解液中含有微小的固體顆粒,建議上柱前使用濾膜(0.22或0.45μm)過濾,或者離心去除。目的蛋白沒有吸附目的蛋白未表達(dá)確保目的蛋白表達(dá)樣品或緩沖液中存在一些干擾因素如非離子去污劑樣品透析或用結(jié)合液稀釋細(xì)胞產(chǎn)生大量的淀粉酶影響結(jié)合力培養(yǎng)基中添加葡萄糖,抑制淀粉酶的表達(dá)融合蛋白使麥芽糖結(jié)合位點(diǎn)阻塞或扭曲,影響了目的蛋白的結(jié)合力更換載體柱子結(jié)合時(shí)間太短將樣品與DextrinBeads振蕩孵育4度2小時(shí)或更長時(shí)間洗脫樣品較雜目的蛋白降解加一些蛋白酶抑制劑,如PMSF、EDTA等平衡/洗雜不充分增加平衡液體積,確保樹脂充分平衡/洗雜,如樹脂太臟按照第3部分進(jìn)行樹脂清洗單克隆抗體純化介質(zhì)哪家有?福建定制試劑代理銷售價(jià)格
上海楚知生物蛋白純化試劑產(chǎn)品介紹:c-Myc蛋白含有bHLH結(jié)構(gòu)域,該蛋白在正常機(jī)體發(fā)育和**發(fā)生過程中起著非常重要的作用,c-Myc是一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子,其異常表達(dá)能促進(jìn)多種**的的發(fā)生和發(fā)展。將人p62c-Myc蛋白的410-419這段氨基酸序列(EQKLISEEDL)融合至目的蛋白的N端或者是C端,可以對目的蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確的檢測、定位和純化。抗體來源:小鼠交叉反應(yīng):c-Myc標(biāo)簽融合蛋白克隆類型:單克隆抗體亞型:IgG2A來源:293細(xì)胞表達(dá)的重組抗體純化方式:rProteinA親和純化產(chǎn)品純度:≥95%,SDS-PAGE檢測儲存緩沖液:1×PBS(pH7.4),0.02%疊氮鈉,50%甘油儲存條件:干冰運(yùn)輸,-20℃可保存一年,避免反復(fù)凍融福建定制試劑代理銷售價(jià)格一步純化檢測原核,酵母或哺乳性動物細(xì)胞表達(dá)的標(biāo)簽蛋白。
蛋白純化試劑抗體純化rProteinA/GBeads4FF純化流程:2.4.1抗體吸附1)取適量的rProteinA/GBeads4FF加入到2ml離心管中,800rpm離心1min,吸棄上清。2)加入0.5ml平衡液,懸浮填料(使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護(hù)蛋白的作用),800rpm離心1min,吸棄上清。再重復(fù)兩次。3)向步驟2)平衡的填料中加入抗體溶液,懸浮填料,室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管,約30min后,800rpm離心1min,收集上清液,留待檢測。4)向3)的填料中加入0.5ml的洗雜液,懸浮填料,進(jìn)行清洗,去除非特異性吸附的雜蛋白,800rpm離心1min,吸棄上清。再重復(fù)兩次。2.4.2抗體交聯(lián)(備選)如果需要將抗體和目標(biāo)抗原復(fù)合物共同洗脫,請忽略本步驟,直接進(jìn)行2.4.3。50ul-1ml填料量均可以按照以下步驟操作,無需額外增加交聯(lián)液體積。1)向清洗過的填料中加入1ml交聯(lián)液,800rpm離心1min,吸棄上清。2)再向其中加入1ml含20mMDMP(dimetylpimelimidatedihydrochloride)的交聯(lián)液,此試劑需要現(xiàn)用現(xiàn)配,懸浮填料,在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管,促使緩沖液和填料充分接觸,約30min后,800rpm離心1min,吸棄上清。
試劑篇:三、根據(jù)蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)進(jìn)行分離蛋白質(zhì)純化流程1、電泳法:各種蛋白質(zhì)在同一pH條件下,因分子量和電荷數(shù)量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。值得重視的是等電聚焦電泳,這是利用一種兩性電解質(zhì)作為載體,電泳時(shí)兩性電解質(zhì)形成一個(gè)由正極到負(fù)極逐漸增加的pH梯度,當(dāng)帶一定電荷的蛋白質(zhì)在其中泳動時(shí),到達(dá)各自等電點(diǎn)的pH位置就停止,此法可用于分析和制備各種蛋白質(zhì)。2、離子交換層析法:離子交換劑有陽離子交換劑(如:羧甲基纖維素;CM-纖維素)和陰離子交換劑(二乙氨基乙基纖維素),當(dāng)被分離的蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)離子交換層析柱時(shí),帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質(zhì)被吸附在離子交換劑上,隨后用改變pH或離子強(qiáng)度辦法將吸附的蛋白質(zhì)洗脫下來。一步純化鏈霉親和素。
蛋白純化試劑Ni Smart Beads純化流程2/3常州天地人和生物科技有限公司平衡液:20mM磷酸鹽,0.5MNaCl,pH7.4洗雜液:20mM磷酸鹽,0.5MNaCl,0-5mM咪唑,pH7.4洗脫液:20mM磷酸鹽,0.5MNaCl,250mM咪唑,pH7.4注:為了減少宿主細(xì)胞蛋白的洗脫,建議在洗雜液中加入低濃度的咪唑。為了消除一些離子作用蛋白的吸附,可以在溶液中加入0.5M-1.0MNaCl??梢圆捎玫蚿H值洗脫或與咪唑結(jié)合,如pH2.5-5.0。2.2樣品準(zhǔn)備1)將細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心杯,7,000rpm(7,500×g),離心15min取上清。如果使用預(yù)裝柱,樣品在使用前比較好用0.22μm或者0.45μm濾膜過濾除菌。2)樣品中含有可耐受范圍內(nèi)試劑,不需要透析或濃縮,可以直接上樣。2.3樣品純化流程1)將NiSmartBeads裝入合適的層析柱,層析用5倍柱體積的平衡液進(jìn)行平衡,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護(hù)蛋白的作用。2)將樣品加到平衡好的NiSmartBeads中,保證目的蛋白與Ni2+充分接觸,提高目的蛋白的回收率,收集流出液。3)用10-15倍柱體積的洗雜液進(jìn)行清洗,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液。4)使用5-10倍柱體積的洗脫液,收集洗脫液,即目的蛋白組分。帶正電荷的強(qiáng)陽離子交換介質(zhì)。安徽核酸提取試劑怎么樣
預(yù)制膠的使用注意事項(xiàng)。福建定制試劑代理銷售價(jià)格
蛋白純化試劑 IMAC Beads 6FF是以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠為基質(zhì),配體結(jié)構(gòu)見圖1所示,填料可以用于螯合各種金屬離子,如Cu2+, Zn2+, Ni2+,Co2+, 對His標(biāo)簽的結(jié)合能力Cu2+>Zn2+>Ni2+ >Co2+,可根據(jù)金屬離子對標(biāo)簽蛋白的結(jié)合力來選擇需要螯合的金屬離子。具體性能見表1。IMAC Beads 6FF除了可以耐受苛刻的試劑條件(見表2)外,因其耐壓的基質(zhì),可以耐受比較高0.3 MPa的壓力,更穩(wěn)定,因此該產(chǎn)品更適合用于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化,可以在相對較高的流速下,實(shí)現(xiàn)對目的蛋白的純化。福建定制試劑代理銷售價(jià)格
上海楚知生物科技有限公司辦公設(shè)施齊全,辦公環(huán)境優(yōu)越,為員工打造良好的辦公環(huán)境。在上海楚知生物近多年發(fā)展歷史,公司旗下現(xiàn)有品牌上海楚知生物等。公司以用心服務(wù)為重點(diǎn)價(jià)值,希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力,將從事生物科技領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢,化學(xué)試劑(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、**爆竹、民用物品、易制毒化學(xué)品),實(shí)驗(yàn)室設(shè)備(除醫(yī)療器械),辦公家具,計(jì)算機(jī)、軟件及輔助設(shè)備(除計(jì)算機(jī)信息系統(tǒng)安全**產(chǎn)品),化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、**爆竹、民用爆竹物品、易制毒化學(xué)品)銷售。 【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動】等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底。自公司成立以來,一直秉承“以質(zhì)量求生存,以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營理念,始終堅(jiān)持以客戶的需求和滿意為重點(diǎn),為客戶提供良好的知楚搖床,博旅發(fā)酵罐,小動物發(fā)光成像,ATS高壓均質(zhì)機(jī),從而使公司不斷發(fā)展壯大。