湖州神經(jīng)生物學電生理膜片鉗原理

膜片鉗使用的注意事項：1.為了防止塵埃、靜電傷害機器，每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時，請先用砂紙輕微打磨，再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀，如果銀絲電極30min未變黑，則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器，后開軟件；先關軟件，后關放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源，打開后至少需1個小時才可關閉。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲（包括地線），在取放細胞片時請關閉放大器。應用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程。湖州神經(jīng)生物學電生理膜片鉗原理

膜片鉗技術基本原理與特點：膜片鉗的基本原理則是利用負反饋電子線路，將微電極所吸附的一個至幾個平方微米的細胞膜的電位固定在一定水平上，對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)觀察，從而研究其功能。膜片鉗技術實現(xiàn)膜電流固定的關鍵步驟是在玻璃微電極邊緣與細胞膜之間形成高阻密封，其阻抗數(shù)值可達10～100 GΩ(此密封電阻是指微電極內與細胞外液之間的電阻)。由于此阻值如此之高，故基本上可看成絕緣，其上之電流可看成零，形成高阻密封的力主要有氫健、范德華力、鹽鍵等。此密封不光電學上近乎絕緣，在機械上也是較牢固的。福州藥理學離子通道技術膜片鉗使用操作流程及注意事項：檢查實驗室門窗。

膜片鉗實驗常見問題及解決方法：膜片鉗技術是電生理記錄的常用手段，目前在科學研究中使用越來越普遍。但在具體膜片鉗實驗操作的過程中，總會遇到各種各樣的問題，對實驗人員造成很多困擾。本次講座主要從實驗角度出發(fā)，以簡單，實用的原則，著重講解實驗中遇到的各種問題，以及解決方法。從選擇實驗樣本開始，按照一般實驗進行的順序，逐步延伸，一直到如何搭建自己個性化的膜片鉗系統(tǒng)，使大家對膜片鉗的基礎知識以及膜片鉗實驗中遇到的各種典型問題及解決辦法有系統(tǒng)的了解。

膜片鉗在通道研究中的重要作用：用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型，并能在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步計算出細胞膜上的通道數(shù)和開放概率，還可以用以研究某些胞內或胞外物質對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細胞信號的跨膜轉導和細胞分泌機制。結合分子克隆和定點突變技術，膜片鉗技術可用于離子通道分子結構與生物學功能關系的研究。膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性：迫切需要一種新型的全自動膜片鉗電生理紀錄系統(tǒng)來解決以上問題。

膜片鉗技術是在電壓鉗技術基礎上發(fā)展起來的，電壓鉗是利用負反饋技術將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值，以研究動作電位產(chǎn)生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關系。但電壓鉗只能研究一個細胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律，而無法反映單個通道的活動特點，同時通過細胞內微電極引導記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗使用的基本方法是，把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下，與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接，導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：細胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。福州全自動膜片鉗實驗應用

膜片鉗技術被稱為研究離子通道的“金標準”。湖州神經(jīng)生物學電生理膜片鉗原理

膜片鉗技術——打開細胞電生理之門：定義：膜片鉗技術被稱為研究離子通道的“金標準”，是一種基于電工學和電化學原理的分析手段，可以通過檢測細胞的電信號(電生理性質)來研究化學物質、電、機械力等刺激因素對細胞功能的影響，從而幫助揭示細胞在生命活動中的化學和生物學機制。原理：膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來，由于電極與細胞膜的高阻封接，在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離，因此，此片膜內開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管，用一個極為敏感的電流監(jiān)視器（膜片鉗放大器）測量此電流強度，就替代單一離子通道電流。湖州神經(jīng)生物學電生理膜片鉗原理