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來源: 發(fā)布時間:2023-01-19

膜片鉗電生理記錄技術(shù):膜片鉗技術(shù)的基本原理:膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,測量單個離子通道開放產(chǎn)生的微小電流,這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數(shù),并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關系。將該部分細胞采用負壓吸破,可以形成比較常見的全細胞記錄模式,可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。膜片鉗的應用:心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。上海細胞生物學電生理膜片鉗網(wǎng)站

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膜片鉗技術(shù):膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來,由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術(shù)的建立,對生物學科學特別是神經(jīng)科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯(lián)系在一起,同時又將神經(jīng)科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯(lián)系、互不滲透,阻礙人們很全認識能力的弊端。杭州藥理學離子通道應用膜片鉗使用的注意事項:向玻璃微電極灌注內(nèi)液時切勿灌太多,以防液體進入銀絲底部增加噪聲。

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膜片鉗電生理技術(shù)的基本原理:膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細胞膜只有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,測量單個離子通道開放產(chǎn)生的微小電流,這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數(shù),并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關系。將該部分細胞采用負壓吸破,可以形成較常見的全細胞記錄模式,可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。更進一步,還可以把吸管吸附放膜片從細胞膜上分離出來,以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進行實驗研究。這種技術(shù)對膜內(nèi)外溶液成分及施加藥物操作都很方便。

膜片鉗使用的注意事項:工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術(shù)。它的基本原理是以一個光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細胞的膜接觸,之后對微電極另一端開口處施加適當?shù)呢搲河秒姌O的纖細開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入,如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接,它的電阻能夠達到數(shù)個或數(shù)十個千兆歐,這世界上就是在化學上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分,通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關聯(lián)。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗的應用:在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位施加各種濃度的藥物來研究。

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膜片鉗技術(shù)的應用范圍:①膜片鉗技術(shù)在通道中的研究;②與藥物作用有關的心肌離子通道研究;③對離子通道生理與病理作用機制的研究;④對單細胞形態(tài)與功能關系的研究;⑤對藥物作用機制的研究;⑥在心血管藥理方面的研究;⑦創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選的研究;⑧在神經(jīng)科學中的研究。現(xiàn)如今,膜片鉗技術(shù)已經(jīng)大為普及,并普遍活躍在離子通道相關的研究當中。也許未來有1天,膜片鉗技術(shù)會過時,但兩百年來的探索歷程,數(shù)代學者們的心血,以及它在科學研究中的功績會一直被銘記。膜片鉗使用操作注意:用儀器的同學必須履行實驗室相關要求,完成值日等相關工作。蕪湖神經(jīng)生物學膜片鉗供應商

全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:擴展功能多。配套擴展設備豐富,如內(nèi)灌流系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等。上海細胞生物學電生理膜片鉗網(wǎng)站

膜片鉗電生理技術(shù)服務的數(shù)據(jù)如何處理:1.內(nèi)面向外式膜片細胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對通道活動的影響。但實驗中難以改變膜外側(cè)物質(zhì),且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細胞內(nèi)鈣的離子通道,如鈣敏感的鉀通道,還可用于細胞內(nèi)和第二信使與通道的調(diào)節(jié)作用。2.外面向外式膜片能接觸膜的兩側(cè),可以任意改變膜外物質(zhì)的濃度,有利于研究離子、遞質(zhì)對膜外表面的作用,多用于研究細胞膜外側(cè)受體控制的離子通道。這些受體直接作用于離子通道,而不需經(jīng)過第二信使系統(tǒng)。因細胞外液容易更換,故加藥方便。缺陷是實驗中難以改變胞內(nèi)成分,而且電極管內(nèi)必須充以低鈣液。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:細胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。上海細胞生物學電生理膜片鉗網(wǎng)站

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