廈門藥理學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄原理

膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細(xì)胞膜面積不同，進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng)。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：外灌流時(shí)間常數(shù)：~200ms；內(nèi)灌流時(shí)間常數(shù)：~2s。廈門藥理學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄原理

膜片鉗實(shí)驗(yàn)中電極制備之在電極前端涂以硅酮樹脂（sylgard），其目的是為了降低電極與灌流液之間的電容，并形成一個(gè)親水界面。經(jīng)此處理后，上述電容可由6～8pF減少到1pF以下。硅酮樹脂對(duì)形成Giga?鄄seals無影響，但可減少本底噪音，對(duì)單通道記錄很重要。在進(jìn)行全細(xì)胞記錄時(shí)，不用硅酮樹脂也可以得到滿意的效果，通常微電極在涂抹硅酮樹脂后再進(jìn)行拋光，但較好是在涂抹后一小時(shí)內(nèi)拋光，否則很難改變電極尖銳端的形狀。全自動(dòng)膜片鉗在藥物篩選中的應(yīng)用：全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)一個(gè)重要的應(yīng)用方向是檢測(cè)早期藥物化合物對(duì)hERG的毒副作用。hERG通道產(chǎn)生的電流是心室復(fù)極中較重要的電流。通道被藥物后抑制直接導(dǎo)致LongQT綜合癥,很可能演變成尖銳端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過速,心室纖顫,直至猝死。目前發(fā)現(xiàn)幾乎所有的臨床藥物所至的LQT或者TdP都作用于hERG,且導(dǎo)致hERG抑制的藥物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上沒有明顯的共性,從而很難預(yù)測(cè),只有通過實(shí)驗(yàn)的方式給予解決。金華藥理學(xué)腦片膜片鉗應(yīng)用膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選的研究。

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn)：膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細(xì)胞膜面積不同，進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng)。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn)：膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細(xì)胞膜面積不同，進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng)。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。該技術(shù)的主要缺陷是必須在細(xì)胞內(nèi)插入兩個(gè)電極，對(duì)細(xì)胞損傷很大，在小細(xì)胞如神經(jīng)元，就難以實(shí)現(xiàn)，又因細(xì)胞形態(tài)復(fù)雜，很難保持細(xì)胞膜各處生物特性的一致。膜片鉗使用操作注意：用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求，完成值日等相關(guān)工作。

膜片鉗技術(shù)是用于紀(jì)錄全細(xì)胞或個(gè)別細(xì)胞膜上離子信道電生理特性的研究方法，目的在于提供基礎(chǔ)研究知識(shí)與新藥開發(fā)時(shí)研究細(xì)胞電特性或小分子藥物對(duì)細(xì)胞膜上離子信道特性的影響，替開發(fā)標(biāo)靶藥物提供一個(gè)測(cè)試平臺(tái)。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)膜片鉗系統(tǒng)由人工操作，實(shí)驗(yàn)人員在取得元代細(xì)胞(例如心肌細(xì)胞與神經(jīng)元)后，將研究對(duì)象細(xì)胞養(yǎng)在玻片上，以手動(dòng)方式將紀(jì)錄電極移動(dòng)放置在胞體上方并壓到細(xì)胞膜上，此時(shí)紀(jì)錄電極在膜外溶液里的電阻大約為3-9 ΜΩ。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。廈門醫(yī)學(xué)膜片鉗方案

全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：軟件的功能全部，可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案自動(dòng)執(zhí)行實(shí)驗(yàn)。廈門藥理學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄原理

電壓鉗與膜片鉗有什么區(qū)別？電壓鉗技術(shù)是通過向細(xì)胞內(nèi)注射一定的電流，抵消離子通道開放時(shí)所產(chǎn)生的離子流，從而將細(xì)胞膜電位固定在某一數(shù)值。由于注射電流的大小與離子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映離子流的大小和方向。膜片鉗技術(shù)鉗制的是膜片，是指采用尖銳端經(jīng)過處理的微電極與細(xì)胞膜發(fā)生緊密接觸，使尖銳端下的這片細(xì)胞膜在電學(xué)上與其它細(xì)胞膜分離，這很大程度降低了背景噪聲，使單通道微弱的電流得以分辨出來。采用電壓鉗技術(shù)將這片膜的電位鉗制在某一數(shù)值，可記錄到單通道電流。從這點(diǎn)上看，膜片鉗技術(shù)是特殊的電壓鉗技術(shù)。隨著膜片鉗技術(shù)的發(fā)展，它已經(jīng)不只只局限于膜片的概念，也不只只采用電壓鉗技術(shù)，還常采用電流鉗技術(shù)。廈門藥理學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄原理

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