南京細(xì)胞生物學(xué)電生理膜片鉗研究方案

膜片鉗記錄的幾種形式：細(xì)胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細(xì)胞膜表面上，形成高阻封接，在細(xì)胞膜表面隔離出一小片膜，既而通過(guò)微管電極對(duì)膜片進(jìn)行電壓鉗制，高分辨測(cè)量膜電流，稱為細(xì)胞貼附膜片。由于不破壞細(xì)胞的完整性，這種方式又稱為細(xì)胞膜上的膜片記錄。此時(shí)跨膜電位由玻管固定電位和細(xì)胞電位決定。因此，為測(cè)定膜片兩側(cè)的電位，需測(cè)定細(xì)胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動(dòng)看，這種形式的膜片是極穩(wěn)定的，因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過(guò)程是完整的，所受的干擾小。膜片鉗使用操作注意：用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求，完成值日等相關(guān)工作。南京細(xì)胞生物學(xué)電生理膜片鉗研究方案

膜片鉗在通道研究中的重要作用：用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開(kāi)閉時(shí)程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時(shí)可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型，并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計(jì)算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開(kāi)放概率，還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對(duì)離子通道開(kāi)閉及通道電流的影響等。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù)，膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。紹興細(xì)胞生物學(xué)腦片膜片鉗原理膜片鉗使用操作注意：在儀器使用以前及使用之后按按照使用時(shí)長(zhǎng)做好登記工作。

膜片鉗技術(shù)操作方法：開(kāi)始封接:調(diào)低微操步進(jìn)速度，使電極尖銳端慢慢向細(xì)胞靠近，如發(fā)現(xiàn)基線方波突然變小，封接電阻上升時(shí)，即停止電極下降，通過(guò)注射器給電極負(fù)壓，封接成功的可見(jiàn)方波很快變小，電阻升至G歐。此時(shí)，調(diào)節(jié)快電容補(bǔ)償按鈕，將快電容電流補(bǔ)償?shù)?，如封接穩(wěn)定后，準(zhǔn)備破膜。破膜:在鉗制電位水平-60mV時(shí)，漏電流<20pA，給予比較大的負(fù)壓(也可根據(jù)情況使用ZAP電破方式破膜)，將要破時(shí)可見(jiàn)基線上下浮動(dòng)，破后，可見(jiàn)基線前后有兩個(gè)較大的慢電容電流。

電壓鉗與膜片鉗有什么區(qū)別？電壓鉗技術(shù)是通過(guò)向細(xì)胞內(nèi)注射一定的電流，抵消離子通道開(kāi)放時(shí)所產(chǎn)生的離子流，從而將細(xì)胞膜電位固定在某一數(shù)值。由于注射電流的大小與離子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映離子流的大小和方向。膜片鉗技術(shù)鉗制的是膜片，是指采用尖銳端經(jīng)過(guò)處理的微電極與細(xì)胞膜發(fā)生緊密接觸，使尖銳端下的這片細(xì)胞膜在電學(xué)上與其它細(xì)胞膜分離，這很大程度降低了背景噪聲，使單通道微弱的電流得以分辨出來(lái)。采用電壓鉗技術(shù)將這片膜的電位鉗制在某一數(shù)值，可記錄到單通道電流。從這點(diǎn)上看，膜片鉗技術(shù)是特殊的電壓鉗技術(shù)。隨著膜片鉗技術(shù)的發(fā)展，它已經(jīng)不只只局限于膜片的概念，也不只只采用電壓鉗技術(shù)，還常采用電流鉗技術(shù)。膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng)：凡是在本平臺(tái)使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求。

膜片鉗系統(tǒng)有如下應(yīng)用局限性(1)光能應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的紀(jì)錄，因此大部分的紀(jì)錄對(duì)象為化細(xì)胞，而對(duì)于需要貼壁生長(zhǎng)的大多數(shù)正常細(xì)胞，現(xiàn)有的自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)就無(wú)法紀(jì)錄；(2)在紀(jì)錄對(duì)象上，目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀(jì)錄胞膜形狀平整飽滿的細(xì)胞，大部分是工具細(xì)胞如化細(xì)胞，此類細(xì)胞有比較強(qiáng)的細(xì)胞膜可以禁得起各種人為操作，而許多具有研究?jī)r(jià)值的細(xì)胞(例如元代培養(yǎng)的神經(jīng)元)胞膜較弱容易破裂，且胞體表面不規(guī)整，現(xiàn)有的自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場(chǎng)。因此，迫切需要一種新型的全自動(dòng)膜片鉗電生理紀(jì)錄系統(tǒng)來(lái)解決以上問(wèn)題。膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請(qǐng)及時(shí)清洗，防止長(zhǎng)菌影響實(shí)驗(yàn)。連云港細(xì)胞生物學(xué)腦片膜片鉗網(wǎng)站

膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：安裝玻璃微電極時(shí)，電極應(yīng)與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。南京細(xì)胞生物學(xué)電生理膜片鉗研究方案

膜片鉗的應(yīng)用：在心血管藥理研究中的應(yīng)用：隨著膜片鉗技術(shù)在心血管方面的普遍應(yīng)用，對(duì)血管疾病和藥物作用的認(rèn)識(shí)不只得到了不斷更新，而且在其病因?qū)W與藥理學(xué)方面還形成了許多新的觀點(diǎn)。正如諾貝爾基金會(huì)在頒獎(jiǎng)時(shí)所說(shuō)：“Neher和Sadmann的貢獻(xiàn)有利于了解不同疾病機(jī)理，為研制新的更為有效的藥物開(kāi)辟了道路”。創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選：在離子通道高通量篩選中主要是進(jìn)行樣品量大、篩選速度占優(yōu)勢(shì)、信息量要求不太高的初級(jí)篩選。較近幾年，分別形成了以膜片鉗和熒光探針為基礎(chǔ)的兩大主流技術(shù)市場(chǎng)。將電生理研究信息量大、靈敏度高等特點(diǎn)與自動(dòng)化、微量化技術(shù)相結(jié)合，產(chǎn)生了自動(dòng)化膜片鉗等一些新技術(shù)。南京細(xì)胞生物學(xué)電生理膜片鉗研究方案

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