寧波細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗技術(shù)研究方案

膜片鉗技術(shù)的工作原理：膜片鉗技術(shù)是用于了解離了通道行為的通用型電生理工具，首先用微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜，然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖銳端與細(xì)胞膜封接，通過(guò)吸破或者電破的方式使與電極尖開(kāi)口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域與其周?chē)鷧^(qū)域在電學(xué)上分隔，然后細(xì)胞膜破裂，進(jìn)而對(duì)此區(qū)域上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄的方法。該方法普遍應(yīng)用于神經(jīng)細(xì)胞，肌纖維細(xì)胞，心肌細(xì)胞及高表達(dá)單一通道的卵母細(xì)胞。主要用于監(jiān)測(cè)離子通道在正?；蛘呒膊顟B(tài)下如何表現(xiàn)，以及不同藥物、離子或其他分析物如何改變這些狀態(tài)。膜片鉗技術(shù)的建立，對(duì)生物科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一項(xiàng)具有重大意義的變革。這是一種通過(guò)離子通道記錄的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè))的離子通道活動(dòng)的技術(shù)。該技術(shù)的出現(xiàn)將生理學(xué)的細(xì)胞水平和分子水平聯(lián)系在一起，又將神經(jīng)科學(xué)的不同亞科融匯在一起，促進(jìn)了各個(gè)學(xué)科之間的聯(lián)系，加速了我們神經(jīng)科學(xué)的研究進(jìn)展，深入探討神經(jīng)活動(dòng)的機(jī)制研究。膜片鉗使用操作注意：封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。寧波細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗技術(shù)研究方案

膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)：膜片鉗技術(shù)的建立，對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的（或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起，同時(shí)又將神經(jīng)科學(xué)的不同分野必然地融匯在一起，改變了既往各個(gè)分野互不聯(lián)系、互不滲透，阻礙人們很全認(rèn)識(shí)能力的弊端。由于電極與細(xì)胞膜的高阻封接，在電極籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離，因此，此片膜內(nèi)開(kāi)放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管，用一個(gè)極為敏感的電流監(jiān)視器（膜片鉗放大器）測(cè)量此電流強(qiáng)度，就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術(shù)的基本原理是通過(guò)負(fù)反饋使得膜電位與指令電壓相等，在電壓鉗制的條件下記錄膜電流。杭州藥理學(xué)膜片鉗實(shí)驗(yàn)原理膜片鉗使用操作注意：禁止私拉電線(xiàn)，如有實(shí)驗(yàn)要求可與老師及時(shí)溝通。

膜片鉗芯片技術(shù)是繼細(xì)胞芯片之后的又一種嶄新的分析細(xì)胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù).由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準(zhǔn)確性特點(diǎn)外,還具有高通量、自動(dòng)化以及細(xì)胞多通道參數(shù)和細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)在線(xiàn)和實(shí)時(shí)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn).因此,該芯片技術(shù)將很大促進(jìn)細(xì)胞離子通道、細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)傳導(dǎo)以及藥物篩選的研究和應(yīng)用.文中具體介紹了膜片鉗芯片技術(shù)的發(fā)展及其應(yīng)用,結(jié)合作者的研究工作,著重介紹了膜片鉗芯片技術(shù)在味覺(jué)細(xì)胞研究的比較新進(jìn)展,并結(jié)合神經(jīng)芯片研究細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的方法,對(duì)采用膜片鉗芯片技術(shù)在細(xì)胞和分子水平上研究味覺(jué)的敏感機(jī)理和傳導(dǎo)機(jī)制的應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。

電壓鉗與膜片鉗有什么區(qū)別？電壓鉗技術(shù)是通過(guò)向細(xì)胞內(nèi)注射一定的電流，抵消離子通道開(kāi)放時(shí)所產(chǎn)生的離子流，從而將細(xì)胞膜電位固定在某一數(shù)值。由于注射電流的大小與離子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映離子流的大小和方向。膜片鉗技術(shù)鉗制的是膜片，是指采用尖銳端經(jīng)過(guò)處理的微電極與細(xì)胞膜發(fā)生緊密接觸，使尖銳端下的這片細(xì)胞膜在電學(xué)上與其它細(xì)胞膜分離，這很大程度降低了背景噪聲，使單通道微弱的電流得以分辨出來(lái)。采用電壓鉗技術(shù)將這片膜的電位鉗制在某一數(shù)值，可記錄到單通道電流。從這點(diǎn)上看，膜片鉗技術(shù)是特殊的電壓鉗技術(shù)。隨著膜片鉗技術(shù)的發(fā)展，它已經(jīng)不只只局限于膜片的概念，也不只只采用電壓鉗技術(shù)，還常采用電流鉗技術(shù)。膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：在放大器打開(kāi)時(shí)不能用手、金屬物品或其它導(dǎo)電的物品接觸電極絲。

膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng)：1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的水電，檢查實(shí)驗(yàn)室門(mén)窗。2.凡是在本平臺(tái)使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求，完成值日等相關(guān)工作（值日生按照實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職）。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時(shí)長(zhǎng)做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱（至少30min）。且用完及時(shí)關(guān)閉。電熱加熱線(xiàn)溫度很高，在使用時(shí)注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改，不得在本機(jī)電腦下載別的軟件，拷數(shù)據(jù)時(shí)需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤(pán)。5.禁止私拉電線(xiàn)，如有實(shí)驗(yàn)要求可與老師及時(shí)溝通。膜片鉗技術(shù)是用來(lái)研究單個(gè)離體的活細(xì)胞、組織切片或細(xì)胞膜片離子流的電生理實(shí)驗(yàn)技術(shù)。廈門(mén)藥理學(xué)腦定位膜片鉗原理及步驟

膜片鉗的應(yīng)用：對(duì)藥物作用機(jī)制的研究。寧波細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗技術(shù)研究方案

膜片鉗的應(yīng)用：對(duì)藥物作用機(jī)制的研究：在通道電流記錄中，可分別于不同時(shí)間、不同部位（膜內(nèi)或膜外）施加各種濃度的藥物，研究它們對(duì)通道功能的可能影響，了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動(dòng)物生理功能的分子機(jī)理。這是膜片鉗技術(shù)應(yīng)用較普遍的領(lǐng)域，既有對(duì)西藥藥物機(jī)制的探討，也普遍用在重要藥理的研究上。如開(kāi)麗等報(bào)道細(xì)胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀(guān)測(cè)到人參二醇組皂苷可抑制正常和“缺血”誘導(dǎo)的大鼠大腦皮層神經(jīng)元L-型鈣通道的開(kāi)放，從而減少鈣內(nèi)流，對(duì)缺血細(xì)胞可能有保護(hù)作用。陳龍等報(bào)道采用細(xì)胞貼附式單通道記錄法發(fā)現(xiàn)烏頭堿對(duì)培養(yǎng)的Wistar大鼠心室肌細(xì)胞L-型鈣通道有阻滯作用。寧波細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗技術(shù)研究方案

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