蕪湖醫(yī)學膜片鉗全細胞記錄

膜片鉗使用的注意事項：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實驗技術(shù)。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當?shù)呢搲河秒姌O的纖細開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入，如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接，它的電阻能夠達到數(shù)個或數(shù)十個千兆歐，這世界上就是在化學上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分，通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗使用操作注意：用儀器的同學必須履行實驗室相關(guān)要求，完成值日等相關(guān)工作。蕪湖醫(yī)學膜片鉗全細胞記錄

膜片鉗技術(shù)發(fā)展至今，已經(jīng)成為現(xiàn)代細胞電生理的常規(guī)方法，它不只可以作為基礎(chǔ)生物醫(yī)學研究的工具，而且直接或間接為臨床醫(yī)學研究服務(wù)，目前膜片鉗技術(shù)普遍應(yīng)用于神經(jīng)（腦）科學、心血管科學、藥理學、細胞生物學、病理生理學、中醫(yī)藥學、植物細胞生理學、運動生理等多學科領(lǐng)域研究。隨著全自動膜片鉗技術(shù)（Automaticpatchclamptechnology）的出現(xiàn)，膜片鉗技術(shù)因其具有的自動化、高通量特性，在藥物研發(fā)、藥物篩選中顯示了強勁的生命力。寧波全自動腦定位膜片鉗膜片鉗使用的注意事項：浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗，防止長菌影響實驗。

一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法：為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響，通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如，需要檢驗?zāi)撤N是否對某種離子通道的影響，則需要在細胞封接后記錄電流數(shù)據(jù)，然后通過在細胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對比數(shù)據(jù)判斷該對離子通道的影響。以往多采用橡皮泥等簡單設(shè)備固定灌流管進行實驗，經(jīng)常出現(xiàn)灌流管固定不良影響實驗的情況，也有精密的灌流裝置，但是結(jié)構(gòu)復雜，且成本非常高。膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。

膜片鉗記錄的幾種形式：細胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細胞膜表面上，形成高阻封接，在細胞膜表面隔離出一小片膜，既而通過微管電極對膜片進行電壓鉗制，高分辨測量膜電流，稱為細胞貼附膜片。由于不破壞細胞的完整性，這種方式又稱為細胞膜上的膜片記錄。此時跨膜電位由玻管固定電位和細胞電位決定。因此，為測定膜片兩側(cè)的電位，需測定細胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動看，這種形式的膜片是極穩(wěn)定的，因細胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的，所受的干擾小。膜片鉗技術(shù)可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細菌離子通道。

膜片鉗技術(shù)是用于紀錄全細胞或個別細胞膜上離子信道電生理特性的研究方法，目的在于提供基礎(chǔ)研究知識與新藥開發(fā)時研究細胞電特性或小分子藥物對細胞膜上離子信道特性的影響，替開發(fā)標靶藥物提供一個測試平臺。傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)膜片鉗系統(tǒng)由人工操作，實驗人員在取得元代細胞(例如心肌細胞與神經(jīng)元)后，將研究對象細胞養(yǎng)在玻片上，以手動方式將紀錄電極移動放置在胞體上方并壓到細胞膜上，此時紀錄電極在膜外溶液里的電阻大約為3-9 ΜΩ。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標：藥液交換迅速。細胞內(nèi)、外液的交換是在平面芯片上進行。南通藥理學膜片鉗成像應(yīng)用

膜片鉗使用的注意事項：在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲。蕪湖醫(yī)學膜片鉗全細胞記錄

膜片鉗實驗中電極制備之在電極前端涂以硅酮樹脂（sylgard），其目的是為了降低電極與灌流液之間的電容，并形成一個親水界面。經(jīng)此處理后，上述電容可由6～8pF減少到1pF以下。硅酮樹脂對形成Giga?鄄seals無影響，但可減少本底噪音，對單通道記錄很重要。在進行全細胞記錄時，不用硅酮樹脂也可以得到滿意的效果，通常微電極在涂抹硅酮樹脂后再進行拋光，但較好是在涂抹后一小時內(nèi)拋光，否則很難改變電極尖銳端的形狀。全自動膜片鉗在藥物篩選中的應(yīng)用：全自動膜片鉗技術(shù)一個重要的應(yīng)用方向是檢測早期藥物化合物對hERG的毒副作用。hERG通道產(chǎn)生的電流是心室復極中較重要的電流。通道被藥物后抑制直接導致LongQT綜合癥,很可能演變成尖銳端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速,心室纖顫,直至猝死。目前發(fā)現(xiàn)幾乎所有的臨床藥物所至的LQT或者TdP都作用于hERG,且導致hERG抑制的藥物在化學結(jié)構(gòu)上沒有明顯的共性,從而很難預測,只有通過實驗的方式給予解決。蕪湖醫(yī)學膜片鉗全細胞記錄

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