南京藥理學腦片膜片鉗應用

全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標：1）操作簡單，全過程可自動化。2）實驗迅速，通量高。一般每天可達到50個實驗數(shù)據(jù)左右。3）藥液交換迅速。細胞內(nèi)、外液的交換是在平面芯片上進行，所以藥液交換非常迅速，作用時間快，外灌流時間常數(shù)：~200ms內(nèi)灌流時間常數(shù)：~2s。4）藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。5）信號準確，噪聲少。使用了先進的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”，極大的減少了噪聲源，記錄數(shù)據(jù)的電噪音很低(小于300fA/500MΩ)。6）擴展功能多。配套擴展設備豐富，如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等等。7）軟件強大。軟件的功能全部，可按照操作者設定的參數(shù)方案自動執(zhí)行實驗，進行細胞吸附、封接和維持全細胞記錄模式；并兼容常規(guī)膜片鉗放大。膜片鉗技術的應用范圍：與藥物作用有關的心肌離子通道研究。南京藥理學腦片膜片鉗應用

膜片鉗技術與其他生物檢測技術的結合應用：1.膜片鉗與光學顯微成像技術結合應用：利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術可以對細胞進行實時成像研究，將膜片鉗技術與光學顯微成像技術結合使用不但可以檢測細胞的電流變化情況，而且還可以對細胞的電信號傳遞活動進行成像觀察。2.膜片鉗與原子力顯微鏡結合應用：將膜片鉗和AFM結合使用的技術可以提高細胞電生理檢測的分辨率和靈敏度；而且，在獲得細胞電生理信息的同時，還能獲取細胞的生物力學性質(zhì)，從而更很全地研究細胞的生理功能。南京藥理學腦片膜片鉗應用膜片鉗技術的應用范圍：在心血管藥理方面的研究。

膜片鉗技術的基本原理和方法：膜片鉗使用的基本方法是，把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下，與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接，導致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來，由于電性能隔離與微電極的相對低電阻（1～5MΩ），只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制，從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術實現(xiàn)的關鍵是建立高阻抗封接，并能通過特定的記錄 儀器 反映這些變化。

膜片鉗使用的注意事項：1.為了防止塵埃、靜電傷害機器，每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時，請先用砂紙輕微打磨，再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀，如果銀絲電極30min未變黑，則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器，后開軟件；先關軟件，后關放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源，打開后至少需1個小時才可關閉。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲（包括地線），在取放細胞片時請關閉放大器。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗使用的注意事項：為了防止塵埃、靜電傷害機器，每天做實驗前請用清水拖地。膜片鉗在通道研究中的重要作用：利用膜片鉗技術還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析。

膜片鉗電生理技術的記錄方式：全細胞記錄法，膜穿孔記錄法（perforatedpatchclamp），巨膜片鉗記錄法（giantmembranepatchclamp），松散封接記錄法（loosepatchclamp）等技術應用：1.為了更換電極內(nèi)液和從電極內(nèi)施加藥物，發(fā)展了微電極內(nèi)灌技術（micropipetteperfusiontechnique）2.在研究細胞間的縫隙連接（gapjunction）通路時，發(fā)展了雙膜片鉗記錄法（doublepatchrecording）3.將富含神經(jīng)遞質(zhì)受體的游離膜片鉗靠近突觸部位，可檢測遞質(zhì)釋放和突觸活動，這一技術稱為膜片鉗探針技術（detector-patchtechnique）4.將特異的膜片探針插入卵母細胞，可檢測細胞內(nèi)第二信使含量，此為膜片填塞技術（patchcrammingtechnique）5.為研究細胞的胞吞與胞吐機制，發(fā)展了膜電容測定法（membranecapacitancemeasurement）。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標：信號準確，噪聲少，使用了先進的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”。廈門醫(yī)學腦定位膜片鉗網(wǎng)站

膜片鉗使用的注意事項：浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗，防止長菌影響實驗。南京藥理學腦片膜片鉗應用

全細胞膜片鉗模式下有電壓鉗記錄和電流鉗記錄兩種。電壓鉗記錄的原理與電壓鉗技術相似，但有所不同：首先，全細胞電壓鉗記錄只使用單根電極，但在電學效果上同時實現(xiàn)了電壓鉗制和電流記錄。其次，電壓鉗記錄的電極不細胞，對細胞造成的損傷較小，因而能用于小細胞如神經(jīng)元的研究。電流鉗記錄則是通過鉗制電極電流來測量膜電位。電流鉗在本質(zhì)上也是電壓鉗位，它將差分放大器的輸出電流與指令電流相比較，然后將這個差動輸出施加到放大器前級的倒相端，通過高速反饋使得同相端的電壓與其相等，無論電極電流是否為零，都能從輸出電壓得到膜電位的準確數(shù)值。南京藥理學腦片膜片鉗應用

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