金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理

膜片鉗使用操作流程及注意事項：1.實驗結(jié)束后必須關(guān)閉實驗室的水電，檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求，完成值日等相關(guān)工作（值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職）。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱（至少30min）。且用完及時關(guān)閉。電熱加熱線溫度很高，在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改，不得在本機電腦下載別的軟件，拷數(shù)據(jù)時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線，如有實驗要求可與老師及時溝通。膜片鉗使用的注意事項：浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗，防止長菌影響實驗。金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理

膜片鉗的應(yīng)用：對單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究：將膜片鉗技術(shù)與單細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)欠磻?yīng)技術(shù)結(jié)合，在全細(xì)胞膜片鉗記錄下，將單細(xì)胞內(nèi)容物或整個細(xì)胞（包括細(xì)胞膜）吸入電極中，將細(xì)胞內(nèi)存在的各種mRNA全部快速逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再經(jīng)常規(guī)PCR擴(kuò)增及待檢的特異mRNA的檢測，借此可對形態(tài)相似而電活動不同的結(jié)果做出分子水平的解釋或為單細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)提供標(biāo)本，為同一結(jié)構(gòu)中形態(tài)非常相似但功能不同的事實提供分子水平的解釋。金華細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄應(yīng)用全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：軟件的功能全部，可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案自動執(zhí)行實驗。

膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法：膜片鉗使用的基本方法是，把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下，與清潔處理過的細(xì)胞膜形成高阻抗封接，導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來，由于電性能隔離與微電極的相對低電阻（1～5MΩ），只要對微電極施以電壓就能對膜片進(jìn)行鉗制，從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計算機進(jìn)行分析處理。膜片鉗技術(shù)實現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接，并能通過特定的記錄儀器反映這些變化。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接。

膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用：它是作者在\"膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用\"領(lǐng)域所進(jìn)行的研究工作的總結(jié)，同時也吸取了國際上的先進(jìn)技術(shù)和新近的研究成果。內(nèi)容包括:細(xì)胞電生理與膜片鉗技術(shù)，膜片鉗系統(tǒng)的組建及實驗技術(shù)概要，膜片鉗放大器原理與低噪聲設(shè)計，單通道和全細(xì)胞電流記錄技術(shù)，數(shù)據(jù)采集和分析，細(xì)胞分泌活動的膜電容監(jiān)測技術(shù)和安培測量技術(shù)，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的測量及鈣庫特性，腦切片膜片鉗技術(shù)，心肌細(xì)胞的藥理特性和植物細(xì)胞的離子通道特性。膜片鉗使用操作流程及注意事項：凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求。

膜片鉗電生理技術(shù)的記錄方式：全細(xì)胞記錄法，膜穿孔記錄法（perforatedpatchclamp），巨膜片鉗記錄法（giantmembranepatchclamp），松散封接記錄法（loosepatchclamp）等技術(shù)應(yīng)用：1.為了更換電極內(nèi)液和從電極內(nèi)施加藥物，發(fā)展了微電極內(nèi)灌技術(shù)（micropipetteperfusiontechnique）2.在研究細(xì)胞間的縫隙連接（gapjunction）通路時，發(fā)展了雙膜片鉗記錄法（doublepatchrecording）3.將富含神經(jīng)遞質(zhì)受體的游離膜片鉗靠近突觸部位，可檢測遞質(zhì)釋放和突觸活動，這一技術(shù)稱為膜片鉗探針技術(shù)（detector-patchtechnique）4.將特異的膜片探針插入卵母細(xì)胞，可檢測細(xì)胞內(nèi)第二信使含量，此為膜片填塞技術(shù)（patchcrammingtechnique）5.為研究細(xì)胞的胞吞與胞吐機制，發(fā)展了膜電容測定法（membranecapacitancemeasurement）。膜片鉗使用的注意事項：安裝玻璃微電極時，電極應(yīng)與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。溫州藥理學(xué)膜片鉗成像方案

全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：外灌流時間常數(shù)：~200ms；內(nèi)灌流時間常數(shù)：~2s。金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理

膜片鉗技術(shù)——打開細(xì)胞電生理之門：定義：膜片鉗技術(shù)被稱為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”，是一種基于電工學(xué)和電化學(xué)原理的分析手段，可以通過檢測細(xì)胞的電信號(電生理性質(zhì))來研究化學(xué)物質(zhì)、電、機械力等刺激因素對細(xì)胞功能的影響，從而幫助揭示細(xì)胞在生命活動中的化學(xué)和生物學(xué)機制。原理：膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細(xì)胞膜通過負(fù)壓吸引封接起來，由于電極與細(xì)胞膜的高阻封接，在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離，因此，此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管，用一個極為敏感的電流監(jiān)視器（膜片鉗放大器）測量此電流強度，就替代單一離子通道電流。金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理

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