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膜片鉗實驗常見問題及解決方法：膜片鉗技術(shù)是電生理記錄的常用手段，目前在科學(xué)研究中使用越來越普遍。但在具體膜片鉗實驗操作的過程中，總會遇到各種各樣的問題，對實驗人員造成很多困擾。本次講座主要從實驗角度出發(fā)，以簡單，實用的原則，著重講解實驗中遇到的各種問題，以及解決方法。從選擇實驗樣本開始，按照一般實驗進行的順序，逐步延伸，一直到如何搭建自己個性化的膜片鉗系統(tǒng)，使大家對膜片鉗的基礎(chǔ)知識以及膜片鉗實驗中遇到的各種典型問題及解決辦法有系統(tǒng)的了解。膜片鉗使用的注意事項：安裝玻璃微電極時，電極應(yīng)與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。杭州醫(yī)學(xué)腦定位膜片鉗網(wǎng)站

膜片鉗電生理技術(shù)：神經(jīng)元細胞膜上有離子通道，它們控制電荷流入和流出細胞，從而調(diào)節(jié)神經(jīng)元激發(fā)。一種用于研究這些通道的生物物理學(xué)特性的極為有用的技術(shù)被稱為膜片鉗記錄。在這種方法中，神經(jīng)科學(xué)家把拋光的玻璃微吸管置于細胞上通過吸力形成高電阻封接。這個過程分隔了一小"片"包含一種或多種離子通道的膜。通過微吸管中的電極，研究人員可以"鉗制"或控制膜的電屬性，這對分析通道活動很重要。該電極還能記錄跨膜電壓的變化，或離子通過膜的流動。上海神經(jīng)生物學(xué)離子通道方案全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標：進行細胞吸附、封接和維持全細胞記錄模式。并兼容常規(guī)膜片鉗放大。

膜片鉗技術(shù)之全細胞記錄的實驗流程：（1）仔細檢查實驗系統(tǒng)各儀器間的線路連接。（2）依次打開各儀器的電源開關(guān)和實驗軟件，檢查各參數(shù)的初始設(shè)置。（3）將樣品置于倒置顯微鏡的載物臺上。（4）電極安裝。（5）偏移電位的補償和電極電阻的測定：在微操縱器控制下使微電極進入浴液，電流基線通常會立刻漂離零位，若此時處于VC模式，在維持電壓為零時，通過調(diào)節(jié)偏移電位補償，使電流基線等于零，此時可見基線上疊加有響應(yīng)電流方波。（6）細胞封接。（7）電極電容補償：若無特殊要求，一般將保持電位設(shè)為受試細胞靜息電位平均值。

膜片鉗電生理記錄技術(shù)：膜片鉗技術(shù)的基本原理：膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位，測量單個離子通道開放產(chǎn)生的微小電流，這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數(shù)，并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。將該部分細胞采用負壓吸破，可以形成比較常見的全細胞記錄模式，可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。膜片鉗使用的注意事項：換液時應(yīng)時刻觀察浴槽，防止液面過低或液體溢出污染鏡頭。

膜片鉗實驗中電極制備之在電極前端涂以硅酮樹脂（sylgard），其目的是為了降低電極與灌流液之間的電容，并形成一個親水界面。經(jīng)此處理后，上述電容可由6～8pF減少到1pF以下。硅酮樹脂對形成Giga?鄄seals無影響，但可減少本底噪音，對單通道記錄很重要。在進行全細胞記錄時，不用硅酮樹脂也可以得到滿意的效果，通常微電極在涂抹硅酮樹脂后再進行拋光，但較好是在涂抹后一小時內(nèi)拋光，否則很難改變電極尖銳端的形狀。全自動膜片鉗在藥物篩選中的應(yīng)用：全自動膜片鉗技術(shù)一個重要的應(yīng)用方向是檢測早期藥物化合物對hERG的毒副作用。hERG通道產(chǎn)生的電流是心室復(fù)極中較重要的電流。通道被藥物后抑制直接導(dǎo)致LongQT綜合癥,很可能演變成尖銳端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速,心室纖顫,直至猝死。目前發(fā)現(xiàn)幾乎所有的臨床藥物所至的LQT或者TdP都作用于hERG,且導(dǎo)致hERG抑制的藥物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上沒有明顯的共性,從而很難預(yù)測,只有通過實驗的方式給予解決。在大多數(shù)膜片鉗實驗，要求所有實驗儀器及設(shè)備均具有良好的機械穩(wěn)定性。嘉興醫(yī)學(xué)膜片鉗全細胞記錄服務(wù)

膜片鉗的應(yīng)用：心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。杭州醫(yī)學(xué)腦定位膜片鉗網(wǎng)站

膜片鉗使用的注意事項：1.為了防止塵埃、靜電傷害機器，每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預(yù)熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時，請先用砂紙輕微打磨，再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀，如果銀絲電極30min未變黑，則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器，后開軟件；先關(guān)軟件，后關(guān)放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源，打開后至少需1個小時才可關(guān)閉。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導(dǎo)電的物品接觸電極絲（包括地線），在取放細胞片時請關(guān)閉放大器。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。杭州醫(yī)學(xué)腦定位膜片鉗網(wǎng)站

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