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來源: 發(fā)布時間:2023-07-26

全自動膜片鉗的優(yōu)勢:自動化:抓取細胞、形成封接、破膜等整個實驗操作全部自動化,極大的節(jié)約實驗人員的時間精力。簡約化:傳統(tǒng)膜片鉗所需要的顯微鏡、顯微操作系統(tǒng)、微電極拉制儀,防震臺、屏蔽網(wǎng)等全都不需要。效率高:是傳統(tǒng)膜片鉗實驗效率的5-10倍。可靠性:實驗結果輕松復制。經(jīng)濟實惠:藥物消耗低,每次實驗記錄較低只需5μl內(nèi)外液體。零技術門檻:無需膜片鉗操作經(jīng)驗,輕松上手。高芯片封接:封接電阻可達1GΩ。確保實驗可靠性。兼容性強:可與市場上大多數(shù)放大器兼容。應用范圍廣:除擁有傳統(tǒng)膜片鉗功能外,還可以對手動膜片鉗無法涉及的亞細胞結構進行記錄。擴展功能多:配套擴展設備豐富,如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等。膜片鉗的應用:對藥物作用機制的研究。南通神經(jīng)生物學離子通道網(wǎng)站

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膜片鉗電生理技術服務記錄的幾種形式:全細胞記錄構型(whole-cell recording) 高阻封接形成后,繼續(xù)以負壓抽吸使電極管內(nèi)細胞膜破裂,電極胞內(nèi)液直接相通,而與浴槽液絕緣,這種形式稱為“全細胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄,或將玻管連到標準高阻微電極放大器上記錄。在電壓鉗條件下記錄到的大細胞全細胞電流可達nA級,全細胞鉗的串聯(lián)電阻(玻管和細胞內(nèi)部之間的電阻)應當補償。任何流經(jīng)膜的電流均流經(jīng)這一電阻,所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細胞內(nèi)的真正電位。電流愈大,愈需對串聯(lián)電阻進行補償。徐州神經(jīng)生物學膜片鉗技術網(wǎng)站膜片鉗使用操作注意:電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。

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膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡,該手段在全細胞記錄中普遍應用。膜片鉗操作實驗:膜片鉗實驗難度大、技術要求高,要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價值的結果和結論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動劑,如何進行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復雜的問題,還需在科研實踐中不斷地探索和解決。

膜片鉗電生理技術服務:膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經(jīng)科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術。些技術的出現(xiàn)自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯(lián)系在一起,同時又將神經(jīng)科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯(lián)系、互不滲透,阻礙人們很全認識能力的弊端。由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術的基本原理是通過負反饋使得膜電位與指令電壓相等,在電壓鉗制的條件下記錄膜電流。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:膜電位固定的方法不同。

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膜片鉗電生理技術:神經(jīng)元細胞膜上有離子通道,它們控制電荷流入和流出細胞,從而調(diào)節(jié)神經(jīng)元激發(fā)。一種用于研究這些通道的生物物理學特性的極為有用的技術被稱為膜片鉗記錄。在這種方法中,神經(jīng)科學家把拋光的玻璃微吸管置于細胞上通過吸力形成高電阻封接。這個過程分隔了一小"片"包含一種或多種離子通道的膜。通過微吸管中的電極,研究人員可以"鉗制"或控制膜的電屬性,這對分析通道活動很重要。該電極還能記錄跨膜電壓的變化,或離子通過膜的流動。膜片鉗技術的應用范圍:對藥物作用機制的研究。合肥藥理學腦片膜片鉗應用

膜片鉗使用的注意事項:換液時應時刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭。南通神經(jīng)生物學離子通道網(wǎng)站

膜片鉗實驗中電極制備之在電極前端涂以硅酮樹脂(sylgard),其目的是為了降低電極與灌流液之間的電容,并形成一個親水界面。經(jīng)此處理后,上述電容可由6~8pF減少到1pF以下。硅酮樹脂對形成Giga?鄄seals無影響,但可減少本底噪音,對單通道記錄很重要。在進行全細胞記錄時,不用硅酮樹脂也可以得到滿意的效果,通常微電極在涂抹硅酮樹脂后再進行拋光,但較好是在涂抹后一小時內(nèi)拋光,否則很難改變電極尖銳端的形狀。全自動膜片鉗在藥物篩選中的應用:全自動膜片鉗技術一個重要的應用方向是檢測早期藥物化合物對hERG的毒副作用。hERG通道產(chǎn)生的電流是心室復極中較重要的電流。通道被藥物后抑制直接導致LongQT綜合癥,很可能演變成尖銳端扭轉型室性心動過速,心室纖顫,直至猝死。目前發(fā)現(xiàn)幾乎所有的臨床藥物所至的LQT或者TdP都作用于hERG,且導致hERG抑制的藥物在化學結構上沒有明顯的共性,從而很難預測,只有通過實驗的方式給予解決。南通神經(jīng)生物學離子通道網(wǎng)站

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