溫州藥理學(xué)實(shí)用膜片鉗技術(shù)

膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)的數(shù)據(jù)如何處理：1.內(nèi)面向外式膜片細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細(xì)胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對通道活動的影響。但實(shí)驗中難以改變膜外側(cè)物質(zhì),且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細(xì)胞內(nèi)鈣的離子通道,如鈣敏感的鉀通道,還可用于細(xì)胞內(nèi)和第二信使與通道的調(diào)節(jié)作用。2.外面向外式膜片能接觸膜的兩側(cè),可以任意改變膜外物質(zhì)的濃度,有利于研究離子、遞質(zhì)對膜外表面的作用,多用于研究細(xì)胞膜外側(cè)受體控制的離子通道。這些受體直接作用于離子通道,而不需經(jīng)過第二信使系統(tǒng)。因細(xì)胞外液容易更換,故加藥方便。缺陷是實(shí)驗中難以改變胞內(nèi)成分,而且電極管內(nèi)必須充以低鈣液。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。膜片鉗使用操作注意：實(shí)驗結(jié)束后必須關(guān)閉實(shí)驗室的水電，檢查實(shí)驗室門窗。溫州藥理學(xué)實(shí)用膜片鉗技術(shù)

膜片鉗法的各種模式：膜外面向內(nèi)模式：從全細(xì)胞模式將膜片微電極向上提起可得到切割分離的膜片，由于它的細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)面面對膜片微電極腔內(nèi)液，膜外面自然封閉而對外，所以這個模式被稱為莫外面向內(nèi)模式。開放細(xì)胞吸附膜內(nèi)面向外模式：將細(xì)胞吸附模式的膜片以外的某部位的胞膜進(jìn)行機(jī)械地破壞，經(jīng)破壞孔調(diào)控細(xì)胞內(nèi)液并在細(xì)胞吸附狀態(tài)下進(jìn)行內(nèi)面向外的單一離子通道記錄。穿孔囊泡膜外面向外模式：從穿孔膜片模式將膜片微電極向上提起，便在微電極尖銳端處形成一個膜囊泡，如果條件較好，此膜囊泡內(nèi)不只有細(xì)胞質(zhì)因子還可有線粒體等細(xì)胞器存在。溫州藥理學(xué)實(shí)用膜片鉗技術(shù)膜片鉗使用的注意事項：浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗，防止長菌影響實(shí)驗。

膜片鉗使用的注意事項：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗技術(shù)。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細(xì)胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當(dāng)?shù)呢?fù)壓用電極的纖細(xì)開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入，如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接，它的電阻能夠達(dá)到數(shù)個或數(shù)十個千兆歐，這世界上就是在化學(xué)上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分，通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。內(nèi)面向外式膜片細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控。

膜片鉗實(shí)驗常見問題及解決方法：膜片鉗實(shí)驗難度大、技術(shù)要求高，要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事，但要從一大批的實(shí)驗數(shù)據(jù)中，經(jīng)過處理和分析，得出有意義、有價值的結(jié)果和結(jié)論，就顯得不那么容易，有許多需要注意和考慮的問題，包括減少噪音，避免電極前端的污染，提高封接成功率，具體實(shí)驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式，為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液，如何選擇阻斷劑、激動劑，如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問題，還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。

膜片鉗記錄的幾種形式：細(xì)胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細(xì)胞膜表面上，形成高阻封接，在細(xì)胞膜表面隔離出一小片膜，既而通過微管電極對膜片進(jìn)行電壓鉗制，高分辨測量膜電流，稱為細(xì)胞貼附膜片。由于不破壞細(xì)胞的完整性，這種方式又稱為細(xì)胞膜上的膜片記錄。此時跨膜電位由玻管固定電位和細(xì)胞電位決定。因此，為測定膜片兩側(cè)的電位，需測定細(xì)胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動看，這種形式的膜片是極穩(wěn)定的，因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的，所受的干擾小。膜片鉗使用的注意事項：玻璃微電極需先用甲醇浸泡，再用酒精燈微燒兩端，使其平滑。杭州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗技術(shù)技術(shù)

膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道研究。溫州藥理學(xué)實(shí)用膜片鉗技術(shù)

膜片鉗實(shí)驗常見問題及解決方法：膜片鉗技術(shù)是電生理記錄的常用手段，目前在科學(xué)研究中使用越來越普遍。但在具體膜片鉗實(shí)驗操作的過程中，總會遇到各種各樣的問題，對實(shí)驗人員造成很多困擾。本次講座主要從實(shí)驗角度出發(fā)，以簡單，實(shí)用的原則，著重講解實(shí)驗中遇到的各種問題，以及解決方法。從選擇實(shí)驗樣本開始，按照一般實(shí)驗進(jìn)行的順序，逐步延伸，一直到如何搭建自己個性化的膜片鉗系統(tǒng)，使大家對膜片鉗的基礎(chǔ)知識以及膜片鉗實(shí)驗中遇到的各種典型問題及解決辦法有系統(tǒng)的了解。溫州藥理學(xué)實(shí)用膜片鉗技術(shù)

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