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病毒核酸檢測(cè)過(guò)程中,病毒保存液的作用尤其重要,我們的檢驗(yàn)工作不可能在采集到樣本后就立馬進(jìn)行檢測(cè),從采集完樣品到開(kāi)始檢測(cè),中間可能遇到各種問(wèn)題,比如異地運(yùn)輸或郵寄標(biāo)本,或樣品太多無(wú)法按時(shí)進(jìn)行檢測(cè)等等,這時(shí)病毒保存液就起到了相當(dāng)大的作用。病毒保存液分為滅活型和非滅活型,那么我們一般選用哪種比較好呢?
滅活型:病毒和細(xì)菌受理化因素作用后失去性,稱為滅活(inactivation)。 多數(shù)病毒比細(xì)菌更容易被滅活。這也使得病毒的長(zhǎng)期保存通常比細(xì)菌的保存更困難。其實(shí)大多數(shù)病毒耐冷不耐熱,對(duì)熱不穩(wěn)定。55—60℃,通常在數(shù)分鐘內(nèi),病毒的衣殼蛋白就會(huì)發(fā)生變性,使病毒失去能力。這可能是因?yàn)榇藭r(shí)的病毒已失去了對(duì)正常細(xì)胞的吸附能力和/或脫衣能力。病毒存在不易保存和易的弊端,但滅活型病毒保存液完美解決了這一弊端。
可以用來(lái)采集咽拭子鼻拭子或者特定部位的組織樣本儲(chǔ)存的樣本可以用于后續(xù)的核酸檢測(cè)或者病毒培養(yǎng)臨床實(shí)驗(yàn)。重慶病毒保存管病毒保存液價(jià)目表
我們除了以上介紹的滅活型的病毒保存液外,還有非滅活的病毒保存液。含有Hank's液體、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、BSA等。多種聯(lián)合,具有抗細(xì)菌和抗的作用;牛血清蛋白(BSA)作為蛋白穩(wěn)定劑,可在病毒的蛋白質(zhì)外殼形成一種保護(hù)膜,使其不易分解,保證病毒的完整性;Hank's緩沖劑構(gòu)建的中性環(huán)境,有助于增加病毒的生存時(shí)間和穩(wěn)定性。滅活型和非滅活型病毒保存液通常用于臨床流感、禽流感、手足口病毒、麻疹等病毒標(biāo)本及支原體、脲原體、衣原體等標(biāo)本的采集和運(yùn)送。深圳一次性使用病毒保存管保存液什么價(jià)格病毒保存液包括Hank's液基礎(chǔ)、慶大霉素、、BSA (V)、冷凍保護(hù)劑、生物緩沖劑和氨基酸。
的病毒采樣管比較大的特點(diǎn)就是它所采集釋放的病毒數(shù)量比普通的病毒采樣管要高出很多,而且保證了病毒粒子的活性和完整性,為后續(xù)的病毒分離和核酸檢測(cè)提供了首要保障。
(1)樣品有效性方面:非滅活病毒保存液必須維持病原體因子的活性,比較好是可以在常溫下可以保持病毒的活性。滿足從樣品采樣到實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的時(shí)間。
有必要限制和預(yù)防共生微生物的繁殖,確保診斷試驗(yàn)的可靠性
滅活病毒保存液需要將病毒滅活但維持病毒的核酸。
(2)安全性方面:因?yàn)椴《静蓸庸艽钶d的基本上都是性物質(zhì),一部分是高病原性性物質(zhì),因此對(duì)包裝容器的要求非常嚴(yán)格,需要滿足安全的同時(shí)保證在運(yùn)輸時(shí)液體不泄漏。
非滅活型的病毒采樣管:
除了滅活型的病毒保存液,保存的病毒完整性更好,檢出率更高,出了核酸檢測(cè)外還可以用于其他研究。
滅活型病毒保存液則使用上更安全,操作環(huán)境要求也不用那么嚴(yán)格,各有各的優(yōu)勢(shì),目前研究的非滅活病毒保存液的成分主要為Hank’s液基礎(chǔ),在這個(gè)基礎(chǔ)上,添加了氯化鉀,氯化鎂和氯化鈣等物質(zhì)為致病菌提供必須的營(yíng)養(yǎng)離子使之專一性更強(qiáng)、且保存時(shí)間更長(zhǎng),更大限度保存致病菌形態(tài)的完整性,提高致病菌提取率。
非滅活型的一次性病毒采樣管的特點(diǎn):
①、低溫非凍型保存,不破壞病毒的外殼,方便長(zhǎng)途運(yùn)輸。
②、適用于各種拭子樣品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子等。
③、保存液中添加了氯化鉀、氯化鎂和氯化鈣等物質(zhì)為致病菌提供了必須的營(yíng)養(yǎng)離子,使病菌專一性更強(qiáng)、且保存時(shí)間更長(zhǎng),可以更大限度保存致病菌形態(tài)的完整性,提高致病菌的提取率。
④、保存液中的成分可以有效防止細(xì)菌和污染。 主要是以運(yùn)送培養(yǎng)基為基礎(chǔ)改良的病毒維持型保存液。它能夠保持病毒在外的活性以及抗原和核酸的完整性。
病毒保存液具體的保存時(shí)間應(yīng)該要區(qū)分不同類型的保存液。通常在采樣前,病毒保存液不管是滅活型的還是非滅活型的,都可以在常溫下保存半年甚至是一年,但是在采樣后保存時(shí)間是很短的。這是因?yàn)楸4娴臅r(shí)間更多情況并不是取決于保存液的質(zhì)量,而是跟病毒或者是核酸本身的特性相關(guān)。
生物病毒是一種個(gè)體及其微小的生物,甚至比、細(xì)菌還要小得多,必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并以復(fù)制方式增殖,是一種非細(xì)胞型生物。因此,不論是滅活型還是非滅活型,采樣之后,病毒都是只能存活很短時(shí)間的。如果沒(méi)有病毒保存液,病毒在體外幾分鐘就會(huì)大量降解。采樣管主要是用于病毒核酸檢測(cè)的,所以滅活型的保存液雖然使病毒裂解了,但是里面添加的RNA酶抑制劑可以保護(hù)其核酸,實(shí)驗(yàn)時(shí)只要能檢測(cè)出核酸就可以作出診斷了。 病毒核酸檢測(cè)過(guò)程中,病毒保存液的作用尤其重要,我們的檢驗(yàn)工作不可能在采集到樣本后就立馬進(jìn)行檢測(cè)。背景病毒保存管病毒保存液價(jià)格便宜
病毒保存液主要適用于****、手足口病毒、流感病毒等常見(jiàn)的病毒樣本采集保存運(yùn)輸工作。重慶病毒保存管病毒保存液價(jià)目表
另一種以核酸提取裂解液為基礎(chǔ)配制的保存液,主要成分為平衡鹽類、EDTA螯合劑、胍鹽(如異硫氰酸胍、鹽酸胍等)、陰離子表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉)、陽(yáng)離子表面活性劑(如十四烷基三甲基草酸銨)、苯酚、8-羥基喹啉、二硫蘇糖醇(DTT)、蛋白酶K等幾種或多種組分,這種保存液是直接裂解病毒釋放核酸,消除核酸分解酶(RNase),如果用于RT-PCR較為合適,但裂解液可以滅活病毒,這種樣本不能用于病毒的培養(yǎng)分離。
病毒保存液使用的金屬離子螯合劑推薦使用EDTA鹽類(如乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸二鈉等),不推薦使用肝素類(如肝素鈉、肝素鋰),以免影響PCR檢測(cè)。 重慶病毒保存管病毒保存液價(jià)目表
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