抗體IgG可通過其Fc段與表面具有相應(yīng)受體的細胞結(jié)合,產(chǎn)生不同的生物學作用。調(diào)理作用(opsonization)指IgG抗體(特別是IgG1和IgG3)的Fc段與中性粒細胞、巨噬細胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,從而增強吞噬細胞的吞噬作用。例如,細菌特異性的IgG抗體可通過其Fab段與相應(yīng)的細菌抗原結(jié)合后,以其Fc段與巨噬細胞或中性粒細胞表面相應(yīng)的Fc受體結(jié)合,通過IgG的Fab段和Fc段的“橋聯(lián)”作用,促進吞噬細胞對細菌的吞噬。抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)指具E有殺傷活性的細胞(如NK細胞)通過其表面的Fc受體識別包被于靶細胞表面抗原(如病毒感染細胞或腫瘤細胞)上的抗體的Fc段,直接殺傷靶細胞。NK細胞是介導ADCC的主要細胞??贵w與靶細胞上的抗原結(jié)合是特異性的,而表達Fc受體細胞的殺傷作用是非特異性的 。多克隆抗體可以用于檢測特定蛋白質(zhì)在不同組織和細胞中的表達情況。山東自身抗體
多克隆單克?。禾烊坏目乖肿又谐:卸喾N不同的抗原表位,以該抗原刺激機體的免疫系統(tǒng)可同時啟動多種B細胞克隆,產(chǎn)生的抗體中會含有多種針對不同抗原表位的抗體,因此稱之為多克隆抗體。多克隆抗體主要從動物免疫血清、恢復(fù)期患者血清或免疫接種人群的血清中獲得。多克隆抗體的優(yōu)勢是:作用全方面,具有中和抗原、免疫調(diào)理、補體依賴的細胞毒作用(CDC)、ADCC等重要作用,而且來源普遍、制備簡單。其缺點是:特異性不高、易發(fā)生交叉反應(yīng),不易大量制備,因而限制了其應(yīng)用的范圍。山東自身抗體多克隆抗體的制備過程相對復(fù)雜,需要較長時間和資源。
抗體規(guī)律:凡能產(chǎn)生抗體的高等動物(包括人類),當注入胸腺依賴性抗原(TD抗原)進行免疫時都有著相同產(chǎn)生抗體的規(guī)律,即存在初次免疫應(yīng)答(primary immune response)和再次免疫應(yīng)答(secondary immune response)。初次免疫應(yīng)答是指機體初次接觸某種抗原物質(zhì)引起特異性抗體產(chǎn)生的過程。其特點是潛伏期長(一周以上),產(chǎn)生的抗體滴度(效價)低、維持的時間短,產(chǎn)生的抗體以IgM為主;再次免疫應(yīng)答是指機體以后再次接觸同樣的抗原后所產(chǎn)生的抗體應(yīng)答過程。其特點是產(chǎn)生抗體的潛伏期短、抗體滴度高,維持的時問長,產(chǎn)生的抗體以IgG為主。非胸腺依賴性抗原(TI抗原)引起的體液免疫由于不產(chǎn)生記憶細胞,因此只有初次免疫應(yīng)答,沒有再次免疫應(yīng)答。
抗體主要功能:啟動補體產(chǎn)生攻膜復(fù)合物使細胞溶解破壞。人IgG1~3和IgM與相應(yīng)抗原結(jié)合后,可因構(gòu)象改變而使其CH2和CH3結(jié)構(gòu)域內(nèi)的補體結(jié)合點暴露,從而通過經(jīng)典途徑啟動補體系統(tǒng),產(chǎn)生多種效應(yīng)功能,其中IgM、IgG1和IgG3啟動補體系統(tǒng)的能力較強,IgG2較弱。IgA、IgE和IgG4本身難以啟動補體,但在形成聚合物后可通過旁路途徑啟動補體系統(tǒng)。通常情況下,lgD不能啟動補體。調(diào)理吞噬和ADCC:IgG可通過其Fc段與表面具有相應(yīng)受體的細胞結(jié)合,產(chǎn)生不同的生物學作用。單克隆抗體可以用于篩選藥物候選物。
單克隆抗體的大量制備主要采用動物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。(1)體內(nèi)誘生法取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進行預(yù)處理。1-2周后,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周,可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可獲得大量單克隆抗體。(2)體外培養(yǎng)法將雜交瘤細胞置于培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,雜交瘤細胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,收集培養(yǎng)上清液,離心去除細胞及其碎片,即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),極大提高了抗體的生產(chǎn)量。單克隆抗體是通過基因工程技術(shù)制備的,具有高度特異性和穩(wěn)定性,被普遍應(yīng)用于調(diào)理和診斷領(lǐng)域。深圳免疫抗體補給公司
單克隆抗體可以用于研究疾病的發(fā)病機制。山東自身抗體
免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,按照預(yù)先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進入外周免疫部位,刺激相應(yīng)B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。細胞融合采用二氧化碳氣體處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細胞。山東自身抗體