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對(duì)于單克隆抗體,我們采用的是機(jī)器人克隆和篩選系統(tǒng),該系統(tǒng)可以處理所有雜交瘤的融合和培養(yǎng)。這種高度自動(dòng)化的流程使用了前列技術(shù),確保達(dá)到比較大產(chǎn)量和比較好的一致性。我們通過(guò)陣列射流自動(dòng)化微陣列系統(tǒng)檢測(cè)融合情況,鑒別陽(yáng)性克隆,然后用ELISA和Western blot進(jìn)行再篩查。***,對(duì)陽(yáng)性克隆多次稀釋,以分離出比較高質(zhì)量的產(chǎn)物,直至樣本達(dá)到**克隆性。這一附加的程序正是默克密理博抗體質(zhì)量?jī)?yōu)于競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手的原因之一。 多克隆抗體的研發(fā)上海益啟品牌抗體規(guī)格。閔行區(qū)WB抗體抗體報(bào)價(jià)
問(wèn)題 可能的原因 處理方法 印跡上出現(xiàn)條紋 在凝膠的蛋白負(fù)荷過(guò)量。 準(zhǔn)確測(cè)量蛋白濃度,載入較少的蛋白。 印跡有污染或模糊 凝膠平衡不當(dāng),或在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中收縮 檢查凝膠平衡時(shí)間。 采用麗春紅S染色時(shí), 轉(zhuǎn)膜無(wú)效 轉(zhuǎn)膜時(shí),小心除去氣泡。 印跡染色較差 確保在電轉(zhuǎn)過(guò)程中因?yàn)闇囟冗^(guò)高而產(chǎn)生氣泡或凝膠/膜變形 采用麗春紅S染色時(shí), 在轉(zhuǎn)膜過(guò)程中蛋白沒(méi)有轉(zhuǎn)移 檢查設(shè)備(轉(zhuǎn)膜盒、盒蓋、電源)。 印跡沒(méi)有染色 檢查在轉(zhuǎn)膜過(guò)程中凝膠和膜的順序是 確保膜位于凝膠的右側(cè)。 否正確崇明區(qū)Calbiochem抗體抗體代理價(jià)神經(jīng)抗體的報(bào)價(jià)具體是多少呢?
例如,磷酸特異性抗體可能只與活化的磷酸化蛋白發(fā)生反應(yīng)。如果您的蛋白定位在胞內(nèi),則必須對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解。流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)可能要選擇識(shí)別細(xì)胞表面分子的抗體。如果您的蛋白有三級(jí)結(jié)構(gòu),且掩蓋了抗原表位,則必須對(duì)樣本進(jìn)行變性,因?yàn)橛行┛贵w無(wú)法識(shí)別自然狀態(tài)的蛋白。一些抗體只在冷凍或非固定組織中起效,而有些抗體只對(duì)經(jīng)抗原修復(fù)后的石蠟切片起效。 目標(biāo)蛋白的物種來(lái)源 比較好選擇明確標(biāo)有目標(biāo)蛋白種屬的抗體。參考抗體說(shuō)明書或網(wǎng)站信息。
在保存抗體時(shí)請(qǐng)注意以下幾點(diǎn): 為保持比較大反應(yīng)性,應(yīng)按照廠家說(shuō)明書保存試劑(如,當(dāng)指定保存溫度為2-8℃時(shí),應(yīng)避免將抗體置于室溫下)。保存抗體的經(jīng)驗(yàn)法則是將其置于非無(wú)霜冰箱/制冷機(jī)內(nèi)的嚴(yán)格密封容器中,遠(yuǎn)離組織固定劑和交聯(lián)試劑。除非加入穩(wěn)定蛋白,如BSA(1% w/v),否則抗體不得 在工作液中長(zhǎng)期保存。避免長(zhǎng)期保存稀釋的抗體。保存時(shí)遇到的主要問(wèn)題是細(xì)菌或***污染。 如果抗體保存在2-8℃超過(guò)2-3天,建議進(jìn)行過(guò)濾除菌和/或加入抑菌劑/防腐劑,如0.05%疊氮化鈉或0.1%硫柳汞。益啟生物是Sigma抗體的代理商。
非特異性條帶 抗體(一抗或二抗)濃度過(guò)高 降低抗體濃度。 SDS可能引起對(duì)固定蛋白條帶的非特 轉(zhuǎn)膜后,振蕩洗滌 異性結(jié)合 在操作過(guò)程中不使用SDS。 條帶擴(kuò)散 抗體(一抗或二抗)濃度過(guò)高 降低抗體濃度。 在凝膠上載入過(guò)多蛋白 減少蛋白上樣量。 黑色印跡,白色條帶, 抗體(一抗或二抗)濃度過(guò)高 減少抗體濃度,特別是HRP偶聯(lián)的二抗。 或信號(hào)快速減少 免疫沉淀 采用抗體-抗原沉淀(又叫免疫沉淀(IP))的方法將特異性蛋白從細(xì)胞或組織裂解液中分離出來(lái)。WB抗體的報(bào)價(jià)具體是多少呢?虹口區(qū)標(biāo)簽抗體抗體聯(lián)系電話
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無(wú)信號(hào) 在檢測(cè)之前,轉(zhuǎn)印膜在貯藏過(guò)程中發(fā) 生蛋白降解 二抗選擇錯(cuò)誤 曝光時(shí)間太短 抗原上樣量不足 抗原可能被破壞 檢測(cè)系統(tǒng) 一抗的親和力較低 化學(xué)發(fā)光底物已喪失活性。 已從膜上剝離抗體并再次雜交。 處理方法 使用新轉(zhuǎn)的膜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 檢查是否使用適當(dāng)?shù)亩埂? 增加曝光時(shí)間。 在凝膠上載入更多的抗原,或在載入之前使用超濾管濃縮樣品, 或使用免疫沉淀,以增加凝膠中的目標(biāo)蛋白量。 檢查確保電泳處理未破壞抗原性。 增加(和優(yōu)化)一抗的濃度和培養(yǎng)時(shí)間、溫度。閔行區(qū)WB抗體抗體報(bào)價(jià)