山西小鼠免疫組化推薦

免疫組化在在病理診斷中，隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來越多的新型抗體的出現(xiàn)，免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷、分類、預(yù)后判斷等方面產(chǎn)生了重大的影響。由于免疫組化技術(shù)也存在一些局限性，因此，深入研究免疫組化原理和技術(shù)，并努力實(shí)現(xiàn)規(guī)范化的操作，才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預(yù)后、指導(dǎo)臨床醫(yī)療中的作用。

觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況，對(duì)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)，由于抗原與抗體特異性結(jié)合，因此通過免疫組化使標(biāo)記抗體的顯色劑(酶、熒光素、同位素、金屬離子等等)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))。IHC所用標(biāo)本主要為兩大類:組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本，其中制作組織標(biāo)本更常用、更基本的方法是石蠟切片。石蠟切片對(duì)于組織形態(tài)保存好，有利于各種染色對(duì)照觀察，而且能長(zhǎng)期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標(biāo)本制作方法。 英瀚斯生物，專業(yè)承接免疫組化等各類病理染色檢測(cè)！山西小鼠免疫組化推薦

免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無(wú)色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。

6）滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過夜（比較好復(fù)溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8）PBS沖洗，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次。

11）顯色劑顯色（DAB等）。

12）自來水充分沖洗。

13）可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。

14）選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?陜西細(xì)胞免疫組化要多久免疫組化公司哪家好？

免疫組化分類中免疫酶標(biāo)方法，英瀚斯生物為您介紹。免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前定位準(zhǔn)確、對(duì)比度好、染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬***法（過氧化物酶-抗過氧化物酶）、ABC法（卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物）、SP法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶）、即用型二步法（聚合物鏈接）等。

免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是***我向一老師請(qǐng)教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片，可能會(huì)破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。

（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可能會(huì)使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時(shí)，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟，如寫著兩者都可，那就都能做。

（3）石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，且容易存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來做原位雜交的的切片，為了防止RNA降解，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。

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免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些？

1、抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯(cuò)誤。不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng)，必須摸索比較好濃度。

2、抗原修復(fù)不全，對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位，以利于與抗體結(jié)合；建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過實(shí)驗(yàn)，這是比較好的時(shí)間和次數(shù)。若不行，還可高壓修復(fù)。

3、組織切片本身這種抗原含量低。

4、血清封閉時(shí)間過長(zhǎng)。

5、DAB孵育時(shí)間過短。

6、細(xì)胞通透不全，抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。

7、開始做免疫組化，建議一定要首先做個(gè)陽(yáng)性對(duì)照片，排除抗體等問題。 免疫組化如何得到好的效果？黑龍江病理免疫組化怎么選擇

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病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說的一句話應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”；不管是臨床醫(yī)師，還是患者，他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化？”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進(jìn)行細(xì)胞的識(shí)別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同，通過染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過，由于組織固定或儲(chǔ)存等，會(huì)造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失，因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展，根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì)，則有了現(xiàn)在免疫組化的方法：不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異，抗體與被測(cè)組織中的特定抗原結(jié)合，進(jìn)而通過一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來。如有相應(yīng)顯色，則證實(shí)可能有被測(cè)抗原；無(wú)顯色則可能無(wú)被測(cè)抗原。當(dāng)然，這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”，如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色，則容易造成“假陽(yáng)性”；或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等，則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加，這些問題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免，前者如各種顯色方法的優(yōu)化；后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開發(fā)及選擇。山西小鼠免疫組化推薦

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