病理實驗外包,病理染色組織樣本保存液多聚甲醛的配置:4%多聚甲醛固定液(4%ParaformaldehydeFixSolution,4%PFAFixSolution)是一種普遍用于免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)、免疫熒光(Immunofluorescence,IF)、免疫細胞化學(xué)(Immunocytochemistry,IC)、流式分析(Fluorescence-activatedcellsorting,FACS)等檢測時組織、組織切片、細胞等生物樣品固定的溶液??棇W(xué)上,4%的多聚甲醛穿透力強,固定均勻,能使組織硬化,有利于切片。該固定劑造成的組織收縮少,損傷小,較為溫和,能很好的保存固有物質(zhì),保持組織的抗原性和細微結(jié)構(gòu)。此外,多聚甲醛可用于固定并保存脂肪及脂類物質(zhì)。南京英瀚斯,專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺。病理實驗外包檢測|組織檢測|科研課題外包|實驗外包服務(wù)。黑龍江專門做病理實驗外包服務(wù)
1.取材與固定固定劑同時具有硬化細胞組織的作用,使制片便于進行。2.洗滌與脫水洗滌是把深入組織中的固定劑洗去,防止染色中的結(jié)晶產(chǎn)生,驅(qū)除組織中的水分,利于透明和浸蠟。3.透明與浸蠟(透蠟)脫水后的組織中水分已被透明劑所代替,而有利于浸蠟。浸蠟的目的是使組織有一定的硬度而有利于切片和細胞組織保持一定的生活時狀態(tài)。4.包埋與切片用石蠟和其他包埋劑(組織填充劑作包埋劑)包繞一定的形狀以便于切片。將包埋好的組織塊用切片機切成一定的厚度(厚度以um計)。5.貼片(展片、撈片)和染色將已且妥的切片在溫水中展平整后用載玻片貼上,稍晾干后再烤片。染色可使細胞和組織被染上不同的顏色而產(chǎn)生一定的折射率,便于顯微鏡觀察。6.切片染色后用膠類物質(zhì)將其封固,便于長期保存。南京英瀚斯,專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺。江西專門做病理實驗外包實驗室病理實驗外包,科研實驗好幫手。
病理實驗外包常見染色介紹Warthin-Starry銀染:Warthin-Starry銀染染色原理在于螺旋體表面的黏蛋白與銀結(jié)合,呈黑色。染色結(jié)果:菌絲及顆粒呈黑色,背景呈黃色。銀染一種是檢測聚丙烯酰胺凝膠中蛋白質(zhì)的方法,其原理是銀離子在堿性pH環(huán)境下被還原成金屬銀,沉淀在蛋白質(zhì)的表面上顯色。銀染的方法種類很多,有文獻報道的就有100多種。但是其準確的染色機制還不是特別地清楚。由于銀染的靈敏度很高,可染出膠上低于1ng的蛋白質(zhì)點,故普遍地用在2D凝膠分析上,及極低蛋白含量測定的垂直凝膠中。主要是用于垂直凝膠電泳中低豐度蛋白的檢測,如內(nèi)源性GST-Pulldown、Co-IP等實驗中相互作用蛋白的研究。南京英瀚斯,專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺。
病理實驗外包,病理染色常見染色介紹PAS染色:PAS染色法(PeriodicAcid-Schiffstain)在組織學(xué)上,主要用來檢測組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基,再用Schiff試劑和醛基反應(yīng)使呈現(xiàn)紫紅色。PAS染色利用高碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基,再用Schiff試劑和醛基反應(yīng)使呈現(xiàn)紫紅色,顯示糖原定位。染色步驟1.石蠟切片脫蠟至水(細胞涂片,冰凍切片直接水洗);2.蒸餾水洗;3.過碘酸酒清夜10min;4.自來水沖洗10min;5.Schiff氏液10min;6.流水沖洗5min;7.用哈瑞蘇木精或邁耶蘇木精染核3min(細胞核染色過深可用鹽酸酒精分化);8.流水沖洗5min;9.常規(guī)脫水、透明、封固。結(jié)果PAS陽性為紅色,細胞核藍色。病理實驗外包檢測,一站式生物病理實驗外包檢測平臺。
病理實驗外包,病理染色多聚甲醛保存組織的注意事項:多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應(yīng)當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。多聚甲醛可長期存在于固定過的細胞或組織樣品中,固定完成后用適當?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時仍會有殘留,因此后續(xù)實驗結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%多聚甲醛固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復(fù),然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。代做實驗,病理實驗外包檢測,實驗樣本檢測。山西生物病理實驗外包哪家靠譜
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病理實驗外包,病理染色常見染色介紹甲苯胺藍染色:甲苯胺藍(Toloniumchloride),是一種化合物,分子式為C28H20N2O10S2·2Na,分子量為656.62,甲苯胺藍深綠色粉末,具古銅色光澤,易溶于水,呈藍紫色溶液。微溶于醇呈藍色,極微溶于氯仿,幾乎不溶于醚。商品大部分為氯化鋅復(fù)鹽。主要用于氧化還原指示劑。用于眼科檢查角膜缺陷和損傷部分,組織化學(xué)中用于測定脫氧核糖核酸和診斷白喉。甲苯胺藍是常用的人工合成染料的一種,屬于醌亞胺染料類,這類染料一般含有兩個發(fā)色團,一個是胺基,一個是醌型苯環(huán),來構(gòu)成色原顯色。染料除有發(fā)色團外,還要有能使色原對組織及其他被染物產(chǎn)生親和力的原子團即助色。助色團能促使染料產(chǎn)生電離成鹽類,幫助發(fā)色團對組織產(chǎn)生染色力,使切片上的組織細胞著色。甲苯胺藍不僅含有兩個發(fā)色團,還含有兩個助色團,為堿性染料,甲苯胺藍中的陽離子有染色作用,組織細胞的酸性物質(zhì)與其中的陽離子相結(jié)合而被染色。軟骨基質(zhì)對甲苯胺藍的異染性,是因為軟骨基質(zhì)的主要成分是軟骨黏蛋白、多糖物質(zhì),而酸性硫酸根與嗜堿性染料有親和力。黑龍江專門做病理實驗外包服務(wù)