湖北組織免疫組化要多少錢(qián)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-05-04

免疫組化的結(jié)果分析:

免疫組化實(shí)驗(yàn)通常需要設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照(或替代對(duì)照)(陽(yáng)性對(duì)照是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無(wú)問(wèn)題;陰性對(duì)照與替代對(duì)照是排除有無(wú)非特異性染色)。一般情況下,陽(yáng)性對(duì)照顏色的特點(diǎn)為:Ag定位,包漿、胞核、胞膜、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。且染色的強(qiáng)度不同(顏色深淺不一);陰性對(duì)照的特點(diǎn)為:染色細(xì)胞與組織無(wú)區(qū)別,顏色具有彌散性,分布均勻。

英瀚斯生物可承接各類病理染色,包括免疫組化。

說(shuō)明:免疫組化實(shí)驗(yàn)可以對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析,但要實(shí)驗(yàn)得到的必須是高質(zhì)量的染色切片,要求背景染色淺且特異性染色較深,這樣分析的結(jié)果才會(huì)比較準(zhǔn)確。 免疫組化怎么做?步驟方法?湖北組織免疫組化要多少錢(qián)

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免疫組化的局限性,可能會(huì)有假陽(yáng)性。陽(yáng)性信號(hào)定位不正確即為假陽(yáng)性,包括著色不勻、背景著色、邊緣效應(yīng),另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。假陽(yáng)性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷В贵w有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用,過(guò)期的抗體或者不著色,或者背景著色,形成假陽(yáng)性;(2)試劑未充分覆蓋組織,組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短,冬季孵育時(shí)間稍長(zhǎng);(4)操作過(guò)程中組織變干,造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,產(chǎn)生假陽(yáng)性;(5)3,3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長(zhǎng),DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色,如內(nèi)源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色,可以通過(guò)血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見(jiàn)于壞死組織中,使壞死組織呈較高的背景染色,在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。江蘇組織免疫組化推薦英瀚斯生物,可做免疫組化定量分析。

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免疫組化的DAB顯色時(shí)間如何把握?

1、DAB顯色時(shí)間不是固定的,主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間,到出現(xiàn)淺棕色本底時(shí)即可沖洗;

2、DAB顯色時(shí)間很短(如幾秒或幾十秒)就出現(xiàn)很深的棕褐色,這很可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)高或抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間;

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3、此外,若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深,還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,需要延長(zhǎng)封閉時(shí)間;

4、DAB顯色時(shí)間很長(zhǎng)(如超過(guò)十幾分鐘)才出現(xiàn)陽(yáng)性染色,一方面可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短(比較好一抗4度過(guò)夜);另一方面就是封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

免疫組化(IHC)利用抗體檢測(cè)組織切片中蛋白質(zhì)和其他抗原的定位。

英瀚斯生物實(shí)驗(yàn)外包,自有專業(yè)病理實(shí)驗(yàn)室,可高效完成免疫組化檢測(cè)。

抗體-抗原的相互作用通過(guò)有色酶底物顯色檢測(cè)或熒光染料熒光檢測(cè)進(jìn)行觀察。雖然IHC在定量方面不如蛋白質(zhì)印跡或ELISA,但是IHC可以提供完整組織中蛋白定位的寶貴信息。蛋白表達(dá)譜對(duì)病理學(xué)家以及作為診斷工具都具有重要意義。

IHC實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于穩(wěn)定、優(yōu)化且可重復(fù)的染色方案,而該方案應(yīng)使用高質(zhì)量的特異性試劑。 免疫組化結(jié)果分析是什么?

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免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹:

英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟:

1、SP三步法

1)石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。

2)0.3%或3%H2O2去離子水(無(wú)色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。

3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘

4)候選步驟:采用抗原修復(fù):微波(建議30分鐘內(nèi)4次中火)、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻,再用3分鐘×3次.

5)血清封閉:室溫15-30分鐘,盡可能與二抗來(lái)源一致。傾去,勿洗。

6)滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過(guò)夜(比較好復(fù)溫)。PBS沖洗,3分鐘×5次。

7)滴加生物素標(biāo)記的二抗,室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8)PBS沖洗,3分鐘×5次。

9)滴加SP(鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶),室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10)PBS沖洗,3分鐘×5次。

11)顯色劑顯色(DAB等)。

12)自來(lái)水充分沖洗。

13)可進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明。

14)選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?大鼠、小鼠組織免疫組化,找英瀚斯生物。浙江做得好的免疫組化檢測(cè)

免疫組化流程是什么樣的?湖北組織免疫組化要多少錢(qián)

免疫組化有哪幾種分類 ?

 1)按標(biāo)記物質(zhì)的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。

 2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。

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3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶(***)法;親和連接,如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,如即用型二步法,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。 湖北組織免疫組化要多少錢(qián)