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免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色?
(1)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。
(2)一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。
(3)內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;
做病理染色,就找英瀚斯,專業(yè)團(tuán)隊(duì)支持。
(4)非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長(zhǎng)二抗來源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果;
(5)縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等;
(6)適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要;
(7)防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。 英瀚斯生物為您詳解免疫組化實(shí)驗(yàn)指南!河南免疫組化檢測(cè)
細(xì)胞屬性的判定,免疫組化也可以進(jìn)行這方面的臨床應(yīng)用。通過特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原成分,來判定細(xì)胞的屬性,確定cancer的來源。如細(xì)胞角蛋白(CK)是上皮性標(biāo)記,CK陽性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標(biāo)記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽性則提示膠質(zhì)cancer;CD20和CD79a陽性則提示B細(xì)胞淋巴瘤;平滑肌肌動(dòng)蛋白(Actin)陽性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質(zhì)瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽性;血管源性cancer中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34陽性等等。如果您需要做實(shí)驗(yàn)外包,可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。寧夏病理免疫組化注意事項(xiàng)英瀚斯生物自有專業(yè)病理染色實(shí)驗(yàn)室,可做免疫組化。
免疫組化的局限性。靈敏度高、精確性和特異性是一種理想的cancer標(biāo)記物必須具有的,但至今所發(fā)現(xiàn)的cancer標(biāo)記物還沒有能完全滿足這些標(biāo)準(zhǔn)。某些正常細(xì)胞也分泌一些cancer標(biāo)記物,因此cancer細(xì)胞學(xué)并不是單獨(dú)產(chǎn)生一種標(biāo)記物,即選用一組抗體比單一抗體更有利。在cancer診斷中評(píng)估免疫組化的局限性主要在抗體特異性和解釋方面。在免疫組化操作中都必須有適當(dāng)?shù)年栃耘c陰性對(duì)照,作為技術(shù)完整性質(zhì)量控制,如對(duì)照組被忽略或不理想時(shí),免疫組化染色的結(jié)果要謹(jǐn)慎對(duì)待,免疫組化的正確結(jié)果不僅要依靠技術(shù)步驟上規(guī)范化操作,而且有賴于正確的解釋,在報(bào)告免疫組化染色結(jié)果時(shí)不應(yīng)孤立地解釋,應(yīng)考慮到診斷與鑒別診斷、所應(yīng)用的抗體特性、所研究組織性質(zhì),同時(shí)還要注意假陽性與假陰性結(jié)果的干擾。
免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷,英瀚斯生物為您介紹。對(duì)于反應(yīng)性增生還是cancer性增生,可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測(cè)B淋巴細(xì)胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時(shí),濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白(bcl-2),bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中,由于90%以上cancer性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá),bcl-2陽性。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA),周期素(Cycling),核抗原(Ki-67)通過對(duì)cancer細(xì)胞增生的程度作出評(píng)價(jià),從而提示增生細(xì)胞的良惡性。英瀚斯生物免疫組化,高效高質(zhì)量出結(jié)果。
免疫組化結(jié)果中的假陰性是指所有抗體標(biāo)記的切片均呈陰性,無陽性信號(hào),假陰性結(jié)果不是真實(shí)的反應(yīng)。導(dǎo)致假陰性結(jié)果的原因有:(1)抗原修復(fù)方法選擇不當(dāng),根據(jù)不同的抗原特點(diǎn)采用不同的修復(fù)方法,大多數(shù)抗體要求熱修復(fù),熱修復(fù)又包括高壓修復(fù)、微波修復(fù)及煮沸熱修復(fù);而對(duì)某些細(xì)胞內(nèi)抗原和細(xì)胞間質(zhì)抗原需要用酶消化,如表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化,而Vimentin則不用修復(fù);(2)一抗本身的問題:一抗效價(jià)降低或失效。在免疫組化中染色結(jié)果的假陰性會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)診或漏診,進(jìn)而影響臨床診斷及延誤醫(yī)療。解決這一問題的可通過設(shè)立陽性對(duì)照,比較兩者染色結(jié)果。若陽性對(duì)照有表達(dá),表明試劑和染色體系及實(shí)驗(yàn)步驟均無問題;若陽性對(duì)照無表達(dá),則檢測(cè)過程中某一試劑或某個(gè)步驟存在問題,應(yīng)逐一查找原因。英瀚斯生物,可做免疫組化定量分析。四川靠譜免疫組化
病理免疫組化多少錢?河南免疫組化檢測(cè)
確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位,臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作。對(duì)于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤,用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來源,進(jìn)一步確定原發(fā)部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性,而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動(dòng)蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結(jié)蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù)。河南免疫組化檢測(cè)