福建動(dòng)物組織免疫組化怎么選擇

免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫(yī)生對(duì)其染色結(jié)果的判斷，進(jìn)而影響病理診斷，所以制作一張良好的免疫組化切片至關(guān)重要，它需要病理醫(yī)生與病理技師兩者間的相互協(xié)調(diào)，密切配合和共同努力，病理醫(yī)生選擇抗體，設(shè)置對(duì)照，判讀結(jié)果，指導(dǎo)技術(shù);而技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，保證染色質(zhì)量。在免疫組化切片的制作過(guò)程存在多個(gè)環(huán)節(jié)，每一環(huán)節(jié)的失誤都可能影響檢測(cè)結(jié)果，如抗原保存，蛋白酶消化，增強(qiáng)技術(shù)及對(duì)抗體的管理、使用和試劑的濃度等等，因此制作一張高質(zhì)量的免疫組織化學(xué)切片是多方面相互配合的結(jié)果。免疫組化如何得到好的效果？福建動(dòng)物組織免疫組化怎么選擇

做免疫組化時(shí)如何選擇一抗？

1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過(guò)封閉等避免）。

2、應(yīng)用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting，或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等；甚至標(biāo)明石蠟切片或冰凍切片。

3、種屬反應(yīng)性的選擇（speciesreactivity）。這一點(diǎn)很重要，表明這種抗體可能存在種屬差別，且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。

4、種屬來(lái)源，一般兔來(lái)源的多是多克隆抗體；而小鼠來(lái)源的多是單克隆抗體，但也有另外。根據(jù)此來(lái)源來(lái)選擇相應(yīng)的二抗。

5、生產(chǎn)廠家的選擇。

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免疫組化結(jié)果中的假陰性是指所有抗體標(biāo)記的切片均呈陰性，無(wú)陽(yáng)性信號(hào)，假陰性結(jié)果不是真實(shí)的反應(yīng)。導(dǎo)致假陰性結(jié)果的原因有:(1)抗原修復(fù)方法選擇不當(dāng)，根據(jù)不同的抗原特點(diǎn)采用不同的修復(fù)方法，大多數(shù)抗體要求熱修復(fù)，熱修復(fù)又包括高壓修復(fù)、微波修復(fù)及煮沸熱修復(fù);而對(duì)某些細(xì)胞內(nèi)抗原和細(xì)胞間質(zhì)抗原需要用酶消化，如表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin則不用修復(fù);(2)一抗本身的問(wèn)題:一抗效價(jià)降低或失效。在免疫組化中染色結(jié)果的假陰性會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)診或漏診，進(jìn)而影響臨床診斷及延誤醫(yī)療。解決這一問(wèn)題的可通過(guò)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照，比較兩者染色結(jié)果。若陽(yáng)性對(duì)照有表達(dá)，表明試劑和染色體系及實(shí)驗(yàn)步驟均無(wú)問(wèn)題;若陽(yáng)性對(duì)照無(wú)表達(dá)，則檢測(cè)過(guò)程中某一試劑或某個(gè)步驟存在問(wèn)題，應(yīng)逐一查找原因。

免疫組化結(jié)果要如何分析？

 （1）陽(yáng)性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法。在40*光鏡下，隨機(jī)選擇不重疊的10個(gè)視野，機(jī)器或人工計(jì)數(shù)陽(yáng)性著色細(xì)胞，每組3~6張不同動(dòng)物組織切片，然后進(jìn)行組間比較即可。

（2）灰密度分析法?？梢酝ㄟ^(guò)在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進(jìn)行灰密度分析，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析即可。

（3）評(píng)分法。用光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽(yáng)性范圍進(jìn)行評(píng)分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），**終可以分?jǐn)?shù)相加，再進(jìn)行比較。對(duì)于以上這幾種方法，各有利弊，請(qǐng)細(xì)心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。

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實(shí)驗(yàn)失敗常見(jiàn)問(wèn)題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陰性？

答：這種現(xiàn)象主要是由操作不當(dāng)導(dǎo)致，可能的原因有：1.染色操作不當(dāng)，致使染色失?。?.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒(méi)有活性；3.緩沖液中有疊氮化鈉，抑制了酶的活性；4.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)?shù)?。建議逐一排查，找到原因后重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陽(yáng)性，這是為什么？答：與上一個(gè)問(wèn)題類似，出現(xiàn)的原因也是試驗(yàn)操作存在問(wèn)題，可能的原因有：1.切片在染色過(guò)程中抗體過(guò)濃，或者干片了；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；3.抗體溫育的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)切片的背景很深，這是為什么？答：以下幾方面會(huì)導(dǎo)致切片的背景過(guò)深：1.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血，造成抗體的非特異性反應(yīng)；2.內(nèi)源性過(guò)氧化酶沒(méi)有完全阻斷，顯色過(guò)程中過(guò)氧化酶與酶底物反應(yīng)，造成背景；3.底物呈色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或呈色反應(yīng)后漂洗不徹底。 英瀚斯生物，專業(yè)病理染色切片平臺(tái)，免疫組化效果好！河北什么是免疫組化怎么樣

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免疫組化中免疫膠體金技術(shù)，英瀚斯生物小編為您說(shuō)明介紹。免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒(méi)有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。福建動(dòng)物組織免疫組化怎么選擇