HE染色全名蘇木精—伊紅染色法,屬于化學(xué)染色法,其主要依靠蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。實驗過程:1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自來水洗。2、蘇木素染色:切片入蘇木素染液染3-5min,自來水洗,分化液分化,自來水洗,返藍液返藍,流水沖洗。3、伊紅染色:切片依次入85%、95%的梯度酒精脫水各5min,入伊紅染液中染色5min。4、脫水封片:切片依次放入無水乙醇I5min-無水乙醇II5min-無水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性樹膠封片。5、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。結(jié)果判讀:細胞核呈藍色,細胞質(zhì)呈紅色科研常備實驗操作之HE染色。陜西結(jié)果客觀的HE染色外包
HE染色病理技術(shù)中**常用的一種方法,通過它可以做出病理診斷和發(fā)現(xiàn)尋求別的輔助方法,以達到準確,完整的病理診斷。一、染色目的 病理學(xué)的所有切片,都必須通過一種以上的染料,通過各種不同的方法,將切片中各種不同的物質(zhì),在不同染液的作用下,將其顯示出來,使之在光學(xué)顯微鏡下,能夠完全的觀看各種結(jié)構(gòu)。例如,HE染色,好質(zhì)量的切片可以清晰地顯示出多不同的結(jié)構(gòu),細胞核著藍黑色,細胞漿著粉紅色,軟骨著藍色等。清晰的結(jié)構(gòu)為診斷提供的依據(jù),因此,染色技術(shù)也是病理技術(shù)中的重要組成部分,必須不斷地總結(jié),方能提高。海南結(jié)果客觀的HE染色多少錢HE染色注意事項以及常規(guī)的流程解析。
HE染色顯微鏡下見切片內(nèi)有大量水珠分析以及應(yīng)對原因:切片經(jīng)梯度乙醇處理后沒有完全脫水,導(dǎo)致二甲苯透明中性樹膠封固后殘留大量水分。對策:移去蓋玻片,用二甲苯溶解封固劑如中性樹膠。將切片置入新鮮的無水乙醇中,待切片重新脫水完全后,用新二甲苯透明,中性樹膠封固。所有用于脫水和透明的液體,在使用一定時間以后,應(yīng)即時更換。光鏡下切片某些區(qū)域難以聚焦分析以及應(yīng)對原因:蓋玻片上可能有封固切片的封固劑。對策:移去蓋玻片,重新用干凈的蓋玻片封片
HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項:多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。多聚甲醛可長期存在于固定過的細胞或組織樣品中,固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時仍會有殘留,因此后續(xù)實驗結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%多聚甲醛固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復(fù),然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。關(guān)于HE染色,你不知道的實驗技巧。
HE染色伊紅溶液中加入少量的冰醋酸(一般小于10%就行),可改變組織等電點,促進伊紅與胞漿蛋白質(zhì)結(jié)合,其本身不參與染色的反應(yīng)。當(dāng)蘇木素染色效能極高,很短時間就導(dǎo)致核漿共染時,可適當(dāng)?shù)靥砑颖姿?一般不超過2%),抑制蘇木素染色效能,方便控制染色時間,同時也能提高蘇木素染色的清晰度。現(xiàn)在有商用的HE染色液賣,但是質(zhì)量參差不齊。如果課題組較大,完全可以自己配制,效果也挺好。配制為乙酸濃度5%-7.5%和鹽酸濃度為0.5%-1%的蘇木素溶液放置一周,即可完全成熟,染色效果好,氧化膜和結(jié)晶都很少(一般蘇木素中酸度越低越容易產(chǎn)生氧化膜和結(jié)晶,這也是提示更換蘇木素的標志之一)。HE染色小貼士以及相關(guān)技巧分析。寧夏專業(yè)的HE染色哪家好
石蠟組織切片的HE染色。陜西結(jié)果客觀的HE染色外包
HE染色攻略:HE染色又稱為蘇木精-伊紅染色,染色后組織或細胞可以借助普通光學(xué)顯微鏡觀察與鑒別細胞凋亡與細胞壞死的一種染色方法。這種方法適用范圍***,對組織細胞的各種成分都可著色,便于***觀察組織構(gòu)造,而且適用于各種固定液固定的材料,染色后不易褪色可長期保存。經(jīng)過HE染色,細胞核被蘇木素染成藍紫色,細胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色??梢杂^察細胞結(jié)構(gòu)、組織層次等等。首先切片組織是否完整,組織有無損傷;然后看切片有無刀痕;***細胞核是否清晰可見,胞核與包漿要對比鮮明。陜西結(jié)果客觀的HE染色外包