湖南什么是免疫組化價(jià)格

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-11-06

免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色? 

(1)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來(lái)控制。這是重要的一條。

(2)一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。

(3)內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來(lái)降低背景染色; 

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(4)非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長(zhǎng)二抗來(lái)源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來(lái)加強(qiáng)封閉效果; 

(5)縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等; 

(6)適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要; 

(7)防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。 英瀚斯生物免疫組化,高效高質(zhì)量出結(jié)果。湖南什么是免疫組化價(jià)格

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醫(yī)療和預(yù)后有關(guān)的免疫組化。與醫(yī)療及預(yù)后有關(guān)的標(biāo)記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標(biāo)記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等,卵巢上皮性cancer中P53的過表達(dá)與cancer的擴(kuò)散、分化、術(shù)后殘存cancer灶呈正相關(guān);乳腺cancer中表達(dá)C-erbB2的浸潤(rùn)性cancer患者預(yù)后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達(dá)增高,PTEN基因表達(dá)減弱,提示cancer預(yù)后不良。(2)細(xì)胞增殖性標(biāo)記物:cancer細(xì)胞增生是否活躍直接影響著臨床的醫(yī)療與預(yù)后,如表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可對(duì)cancer細(xì)胞的增生做出評(píng)價(jià),表達(dá)指數(shù)越高,表明其增殖指數(shù)越活躍,惡性度增高,預(yù)后不良,其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對(duì)乳腺cancer的研究中發(fā)現(xiàn)Ki-67、EGFR陽(yáng)性者,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高,并與ji素受體的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等,應(yīng)用更為范圍廣的的是子宮內(nèi)膜cancer及乳腺cancer,如對(duì)乳腺cancer中ER、PR的檢測(cè),有助于決定臨床醫(yī)療中是否需要加入內(nèi)分泌ji素阻斷醫(yī)療,并能判斷預(yù)后,ER及PR陽(yáng)性表達(dá)、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達(dá)病例對(duì)三苯氧胺等ji素醫(yī)療反應(yīng)良好,而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大。江蘇免疫組化推薦免疫組化相關(guān)知識(shí)匯總。

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免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)總結(jié):

?本實(shí)驗(yàn)室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片:使蠟片水分蒸發(fā),石蠟軟化,組織切片牢固貼在玻片上;烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復(fù)時(shí),使片子始終浸沒在修復(fù)液中,液體不能干。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱,濕盒放置1h,省時(shí)間和結(jié)合效果好,不要超過1h,容易過染。

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?二抗使用:兩個(gè)二抗放大信號(hào)或一個(gè)二抗;若抗體信號(hào)強(qiáng),可不用放大信號(hào),盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解,盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配,放于4度儲(chǔ)存時(shí)間久了效果不佳。

?復(fù)水和脫水時(shí)所用的梯度酒精不可混用,要區(qū)分開。

?加抗體和顯色液時(shí),都要將片子甩干,在半干半濕的狀態(tài)下再加,不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個(gè)操作過程中在顯色之前,一定不能干片。

細(xì)胞屬性的判定,免疫組化也可以進(jìn)行這方面的臨床應(yīng)用。通過特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原成分,來(lái)判定細(xì)胞的屬性,確定cancer的來(lái)源。如細(xì)胞角蛋白(CK)是上皮性標(biāo)記,CK陽(yáng)性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標(biāo)記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽(yáng)性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽(yáng)性則提示膠質(zhì)cancer;CD20和CD79a陽(yáng)性則提示B細(xì)胞淋巴瘤;平滑肌肌動(dòng)蛋白(Actin)陽(yáng)性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質(zhì)瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽(yáng)性;血管源性cancer中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34陽(yáng)性等等。如果您需要做實(shí)驗(yàn)外包,可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。免疫組化方法步驟是什么?

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免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹:

英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟:

1、SP三步法

1)石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。

2)0.3%或3%H2O2去離子水(無(wú)色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。

3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘

4)候選步驟:采用抗原修復(fù):微波(建議30分鐘內(nèi)4次中火)、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻,再用3分鐘×3次.

5)血清封閉:室溫15-30分鐘,盡可能與二抗來(lái)源一致。傾去,勿洗。

6)滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過夜(比較好復(fù)溫)。PBS沖洗,3分鐘×5次。

7)滴加生物素標(biāo)記的二抗,室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8)PBS沖洗,3分鐘×5次。

9)滴加SP(鏈霉親和素-過氧化物酶),室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10)PBS沖洗,3分鐘×5次。

11)顯色劑顯色(DAB等)。

12)自來(lái)水充分沖洗。

13)可進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明。

14)選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?做免疫組化意味什么?吉林免疫組化可以做什么

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確定cancer分期,免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床可以進(jìn)行處理哦,英瀚斯生物為您處理。cancer分期是判斷預(yù)后的一個(gè)指標(biāo),與是否浸潤(rùn)、有無(wú)淋巴管或血管侵襲密切相關(guān),而通過免疫組化方法可以判斷cancer是否浸潤(rùn)、有無(wú)淋巴管或血管侵襲。層黏連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可以清楚的顯示基膜的主要成分,用于區(qū)分原位*和浸潤(rùn)*,一旦上皮性*突破基膜為浸潤(rùn),未突破基膜為原位;顯示血管和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物第八因子相關(guān)蛋白、D2-40等則可清楚顯示cancer對(duì)血管或淋巴管的浸潤(rùn)。因此對(duì)許多cancer的良惡性鑒別及有無(wú)血管或淋巴管浸潤(rùn),免疫組化結(jié)果作為主要的鑒別依據(jù)。湖南什么是免疫組化價(jià)格

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