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實驗失敗常見問題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陰性？

答：這種現(xiàn)象主要是由操作不當(dāng)導(dǎo)致，可能的原因有：1.染色操作不當(dāng)，致使染色失敗；2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性；3.緩沖液中有疊氮化鈉，抑制了酶的活性；4.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)?shù)?。建議逐一排查，找到原因后重新進(jìn)行實驗。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陽性，這是為什么？答：與上一個問題類似，出現(xiàn)的原因也是試驗操作存在問題，可能的原因有：1.切片在染色過程中抗體過濃，或者干片了；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應(yīng)時間過長；3.抗體溫育的時間過長等。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)切片的背景很深，這是為什么？答：以下幾方面會導(dǎo)致切片的背景過深：1.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血，造成抗體的非特異性反應(yīng)；2.內(nèi)源性過氧化酶沒有完全阻斷，顯色過程中過氧化酶與酶底物反應(yīng)，造成背景；3.底物呈色反應(yīng)時間過長或呈色反應(yīng)后漂洗不徹底。 免疫組化失敗的原因？福建免疫組化推薦

免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷，英瀚斯生物為您介紹。對于反應(yīng)性增生還是cancer性增生，可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測B淋巴細(xì)胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時，濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中，由于90%以上cancer性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá)，bcl-2陽性。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通過對cancer細(xì)胞增生的程度作出評價，從而提示增生細(xì)胞的良惡性。遼寧切片免疫組化多少錢免疫組化流程是什么樣的？

臨床應(yīng)用中，藥物靶點免疫組化，英瀚斯生物專業(yè)做實驗外包服務(wù)，一站式醫(yī)學(xué)科研平臺。免疫組化及分子病理學(xué)方法在疾病診斷中只只起輔助醫(yī)療的作用，而藥物病理學(xué)是用病理學(xué)的方法確定藥物醫(yī)療的靶點、評價藥物醫(yī)療的療效、預(yù)測藥物醫(yī)療的反應(yīng)，因此藥物靶點免疫組化屬“單獨的診斷”。因此對于對照的設(shè)置、質(zhì)量的控制均需要更高的要求，如對試劑的要求，不同于一般的診斷試劑，應(yīng)按對藥物管理的要求操作。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫(yī)生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫(yī)療的依據(jù)。

免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？ 

（1）縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。

（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。

（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細(xì)胞多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色； 

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（4）非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果； 

（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等； 

（6）適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要； 

（7）防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強(qiáng)非特異性著色。 免疫組化的樣本保存要求是什么？

免疫組化實驗所用的抗體

免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

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免疫組化常用的染色方法

根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法常用。 免疫組化怎么做？步驟方法？福建免疫組化推薦

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免疫組化指的是根據(jù)抗體與抗原特異結(jié)合的原理來檢測組織切片中的抗原（如蛋白）。immuno的詞根來自操作中所使用的抗體，而histo意味著組織。另一種類似的技術(shù)是免疫細(xì)胞化學(xué)（Immunocytochemistry，簡稱ICC）。這兩個詞大家經(jīng)?；熘茫粗孟癫畈欢?，但實際上還是有點區(qū)別。IHCvsICC對于IHC，組織是來自患者或動物，經(jīng)過冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片，封片后再處理。通過這種方法，研究人員可觀察細(xì)胞組分的定位，同時維持周圍組織的原先結(jié)構(gòu)。對于ICC，大部分細(xì)胞外基質(zhì)及其他基質(zhì)組分被去除，只剩下整個細(xì)胞來染色。ICC的來源可以是細(xì)胞懸液，來自患者或動物（如血涂片、拭子等），或在實驗室中進(jìn)行的組織培養(yǎng)細(xì)胞系。 福建免疫組化推薦

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