黑龍江外泌體攝取

外泌體作為疾病診斷的標(biāo)志物具有其獨特優(yōu)勢:(1)與正常細(xì)胞相比，病變細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體在分泌量和內(nèi)容物方面存在明顯差異。病變的細(xì)胞和組織能夠產(chǎn)生更多外泌體。(2)由于特殊的生成方式，外泌體的組成不同于來源細(xì)胞。其內(nèi)包含的一些特異性蛋白質(zhì)能夠揭示外泌體的起源、結(jié)構(gòu)和運輸方式，有利于深入了解外泌體的產(chǎn)生機制。(3)病變細(xì)胞分泌的外泌體通過胞吐的過程進(jìn)入血液、尿液等體液，囊泡狀結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)外泌體內(nèi)部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干擾，有利于保持其結(jié)構(gòu)完整和生物活性，通過對此類體液進(jìn)行分析可以實現(xiàn)疾病的無創(chuàng)或微創(chuàng)檢測。外泌體作為細(xì)胞間信號傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門。黑龍江外泌體攝取

目前市面上開發(fā)的外泌體提取試劑盒，是根據(jù)外泌體表面由類似于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層具有一定疏水性這一特性，用試劑捆綁水分子，從而可通過常規(guī)離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少、對設(shè)備要求低，但與差速離心方法類似，其分離得到的沉淀包含其他細(xì)胞分泌的囊泡，且血清中含有大量血清蛋白分子，成分復(fù)雜，很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質(zhì)。Sabapatha等曾根據(jù)來源于胎盤的外泌體表面特異表達(dá)這一特性，使用耦合到磁珠的抗抗體，采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少，不適用于大規(guī)模提取制備，且免疫磁珠價格昂貴，不利于提取技術(shù)的普及。杭州外泌體質(zhì)譜外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。

在運輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經(jīng)在臨床上使用的未成熟的樹突細(xì)胞作為母代細(xì)胞，通過化學(xué)轉(zhuǎn)染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結(jié)合，使外泌體對DOX的運輸具有靶向性。將對iRGD肽靶向的外泌體和未經(jīng)靶向性處理的外泌體用DiR染料標(biāo)記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細(xì)胞的小鼠體內(nèi)，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經(jīng)出現(xiàn)在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經(jīng)靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達(dá)中流組織處，說明對iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。

在血液和大多數(shù)體液（如尿液、腦脊液、唾液、胸腹腔積液、羊水和乳汁等）中均可檢測到外泌體。血液外泌體的檢測通常采用EDTA抗凝血分離的血漿，miRNA等一些微小RNA則采用血清樣本。泌尿系統(tǒng)中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs，但外泌體外膜則可幫助RNA免于被降解，因此研究尿液外泌體miRNAs更具有應(yīng)用價值。相較于血清中相關(guān)miRNA的水平，腦脊液外泌體中的miR-21可作為膠質(zhì)瘤診斷和預(yù)后的指標(biāo)，特別對預(yù)測中流復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移具有價值。唾液樣本在安靜狀態(tài)下主要來源于舌下腺和頜下腺，刺激狀態(tài)下則主要來源于腮腺。建立記錄各論文實驗條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一。

姜黃素的臨床應(yīng)用也存在著問題，比如其水溶性差，在體內(nèi)代謝快速以及易被快速清chu。利用鼠淋巴瘤細(xì)胞系(EL-4)的外泌體作為姜黃素的載體，可以提高姜黃素的溶解性、穩(wěn)定性以及生物利用度，將姜黃素和載有姜黃素的外泌體腹膜內(nèi)注射到脂多糖(LPS)誘發(fā)的敗血性休克的小鼠模型中，結(jié)果顯示經(jīng)外泌體運載的姜黃素可促進(jìn)小鼠肺部抑制免疫反應(yīng)的CD11b+Gr-1+細(xì)胞的凋亡而表現(xiàn)出抗yan癥的效果，而單純姜黃素的注射不能起到促進(jìn)CD11b+Gr-1+細(xì)胞的凋亡效果(與注射PBS的對照組類似)。研究者還進(jìn)行了目前常用的脂質(zhì)體負(fù)載姜黃素，與外泌體負(fù)載姜黃素對比。脂質(zhì)體和外泌體均具備作為姜黃素的載體的能力，但外泌體由于其更易被Gr-1+細(xì)胞吞噬，從而可以起到更好的zhiliao效果。外泌體可以直接進(jìn)入受體細(xì)胞影響細(xì)胞功能。杭州外泌體質(zhì)譜

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體。黑龍江外泌體攝取

研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達(dá)外泌體公認(rèn)的標(biāo)志蛋白分子，同時也表達(dá)胎盤特異性蛋白分子，證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見，動態(tài)光散射分析粒徑，結(jié)果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻(xiàn)報道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經(jīng)過PKH67熒光染料染色后，與細(xì)胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進(jìn)入細(xì)胞的活性，進(jìn)一步驗證了我們應(yīng)用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體，并從蛋白標(biāo)志分子、電鏡、粒徑及分布、進(jìn)入細(xì)胞活性四方面對其進(jìn)行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎(chǔ)。黑龍江外泌體攝取