海洋生物外泌體測序

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不寬泛。外泌體天然的可以攜帶遺傳到靶細胞中，從而在生物學和致病過程中誘導遺傳修飾。海洋生物外泌體測序

外泌體（exosome）是一種由活細胞分泌的，直徑約為40～160nm的具有雙層膜結構的生物活性囊泡。它攜帶了分泌細胞包含的生物活性物質，如DNA、miRNAs、mRNA、長鏈非編碼RNA（LncRNA）、酶、蛋白質和細胞代謝物等。外泌體在細胞間通信中扮演著十分重要的角色。目前對于外泌體的研究涉及包括瘤的發(fā)生和發(fā)展、侵襲轉移機制、瘤診斷標志物以及藥物傳遞系統(tǒng)等諸多方面。外泌體是一個高度異質性的群體，具有獨特的誘導復雜生物學反應的能力。外泌體的異質性可以根據(jù)其大小、含量(載物)、對受體細胞的功能影響以及細胞來源來區(qū)分。這些特征的不同組合導致了外泌體的復雜異質性。海洋生物外泌體miRNA測序血液中的成纖維細胞所釋放的外泌體，可以促進角質形成細胞的移動和增殖以及血管新生來促進傷口愈合。

外泌體在神經(jīng)系統(tǒng)中與神經(jīng)回路的控制相關，同時各種神經(jīng)退行性疾病的致病蛋白還可以通過外泌體釋放到細胞外并傳遞到其他細胞，與病情發(fā)展密切相關。病細胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關的分子，構建適合病細胞生長的微環(huán)境，促進病細胞的發(fā)展。另外，病細胞來源的外泌體上粘著分子的表達形式?jīng)Q定著癥狀向身體部位的轉移途徑。近，有報告指出脂肪細胞釋放的外泌體對肝臟的遺傳基因表達有控制作用。許多病毒利用外泌體的產(chǎn)生路徑傳播細胞，受病毒傳播的細菌和寄生蟲通過外泌體控制其他受細胞傳播的細菌、寄生蟲的活動。

除運輸藥物進行疾病zhiliao之外，外泌體還能進行免疫zhiliao，外泌體免疫zhiliao和載藥zhiliao。進行免疫調節(jié)時，外泌體通常運載TGF-β1、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)或MAGE抗原等物質。在這些研究中，分泌外泌體的母代細胞往往選用具有很好抗原遞呈(antigenpresentation)能力的樹突細胞或者中流細胞。Cao等采用鼠B淋巴瘤細胞作為母代細胞，通過熱處理的方式使淋巴瘤細胞分泌的外泌體含有更多的熱休克蛋白(HSP60和HSP90)和其他一些刺激免疫的分子，如主要組織相容性復合物(MHC-I和MHC[1]II)以及CD40、CD86等，與未熱處理的鼠B淋巴瘤細胞分泌的外泌體相比，熱處理后分泌的外泌體可以增強對T細胞的激huo能力，從而增強這種基于外泌體的疫苗的抗中流能力。各種細胞粘著分子在外泌體膜表面表達，由其決定外泌體被運輸往哪一種細胞。

液體活檢是一種非侵入性的血液檢測突破性技術，能早期快速地檢測中流及其病灶或者轉移過程中釋放到血液中的循環(huán)中流細胞（circulatingtumorcell，CTC）、循環(huán)中流DNA（circulatingtumorDNA，ctDNA）和中流外泌體等中流組分。中流外泌體作為液體活檢的一個重要組成，基于其內容物成分多樣和穩(wěn)定等優(yōu)勢，正成為中流標志物相關研究的熱點。中流來源納米大小的外泌體具有易通過血腦屏障、天然的歸巢特性、雙分子層脂質結構的穩(wěn)定性和高效的生物相容性等特征。因此，中流外泌體正成為中流靶向zhiliao理想的載體，尤其是工程化外泌體更表現(xiàn)出很好的中流靶向干預和增強藥物zhiliao的效果。外泌體觀察到它們可以在體內刺激免疫應答。吉林鼻腔灌洗液外泌體

PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上。海洋生物外泌體測序

在血液和大多數(shù)體液（如尿液、腦脊液、唾液、胸腹腔積液、羊水和乳汁等）中均可檢測到外泌體。血液外泌體的檢測通常采用EDTA抗凝血分離的血漿，miRNA等一些微小RNA則采用血清樣本。泌尿系統(tǒng)中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs，但外泌體外膜則可幫助RNA免于被降解，因此研究尿液外泌體miRNAs更具有應用價值。相較于血清中相關miRNA的水平，腦脊液外泌體中的miR-21可作為膠質瘤診斷和預后的指標，特別對預測中流復發(fā)或轉移具有價值。唾液樣本在安靜狀態(tài)下主要來源于舌下腺和頜下腺，刺激狀態(tài)下則主要來源于腮腺。海洋生物外泌體測序