dii染料標(biāo)記外泌體

外泌體(exosome)是多種活細(xì)胞經(jīng)過“內(nèi)吞–融合–外排”等一系列過程主動向胞外分泌的直徑為30~150nm的雙層膜結(jié)構(gòu)細(xì)胞外囊泡(extracellularvesicles,EVs),廣fan存在于血液、尿液和唾液等生物體液中,并通常作為細(xì)胞間胞質(zhì)蛋白、核酸和脂質(zhì)的轉(zhuǎn)移載體發(fā)揮運輸調(diào)控作用,被認(rèn)為是細(xì)胞間通訊的核xin部分。外泌體于1983年在HARDING等和PAN等研究羊網(wǎng)織紅細(xì)胞分化的過程中被發(fā)現(xiàn),并于1996年由RAPOSO等證實能夠作為一種細(xì)胞間通訊結(jié)構(gòu)在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用后得到了廣fan關(guān)注。近年來,隨著外泌體在中流、心血管和感ran性疾病等多種疾病形成中的生物學(xué)作用和功能被逐漸揭示,尤其是2015年MELO等發(fā)現(xiàn),外泌體Glypican-1蛋白可有效區(qū)分慢性胰腺炎與胰腺ai以來,外泌體作為疾病診斷、預(yù)后預(yù)測標(biāo)志物以及藥物靶向zhiliao載體的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)應(yīng)用也得到了迅速的推進(jìn)。外泌體分析會引起何種生理作用，這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向。dii染料標(biāo)記外泌體

Pascucci等將包含有紫杉醇的間充質(zhì)細(xì)胞來源外泌體與胰腺ai細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)裝載紫杉醇的間充質(zhì)細(xì)胞外泌體具有很強的抗中流增殖效果。Tian等為降低免疫原性與毒性，采用小鼠未成熟樹突狀細(xì)胞所產(chǎn)生外泌體作為藥物載體。同時為實現(xiàn)外泌體運輸?shù)陌邢蛐?，使?xì)胞表達(dá)能夠識別乳腺ai細(xì)胞的外泌體膜蛋白Lamp2b(lysosomeasso[1]ciatedmembraneglycoprotein2b，溶酶體相關(guān)膜蛋白2)。并采用電穿孔的方法，在純化所得的小鼠未成熟樹突狀細(xì)胞外泌體中載入阿霉素。結(jié)果表明該外泌體能夠特異性的將阿霉素傳遞給中流組織，抑制中流生長且無明顯毒性。成都組織外泌體從外泌體中篩選的生物標(biāo)志物，可用于疾病的診斷、預(yù)后及治理。

外泌體是由細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的晚期內(nèi)泡小體以膜融合的方式通過胞吐方式主動分泌到細(xì)胞外環(huán)境的一種直徑30-100nm的微型囊泡，其形態(tài)規(guī)則，呈圓形或橢圓形杯狀結(jié)構(gòu)，不同類型細(xì)胞分泌的外泌體具有很多共性，包括膜上富含脂筏及豐富的跨膜蛋白，如四次跨膜蛋白家族成員CD63、CD81等，表面為類似于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層，具有一定的疏水性。外泌體能夠攜帶微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白質(zhì)等生物活性分子，并在細(xì)胞外環(huán)境穩(wěn)定存在，而且通過傳遞供體細(xì)胞信息，調(diào)節(jié)靶細(xì)胞的代謝通路。外泌體可由多種類型細(xì)胞分泌，妊娠期母體血清中存在表達(dá)胎盤堿性磷酸酶（placentalalkalinephosphatase,）的胎盤來源外泌體，并且在妊娠中發(fā)揮重要的作用。

外泌體（Exosome）開始被認(rèn)為是毫無作用的“垃圾”，但隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)事實并非如此，外泌體（Exosome）是具有功能活性并可進(jìn)行細(xì)胞間信息傳遞的微囊泡。外泌體（Exosome）介導(dǎo)瘤細(xì)胞的免疫耐受。瘤細(xì)胞來源的外泌體（Exosome）本身可作為瘤抗原，因此，瘤來源的外泌體（Exosome）既是一種抗原呈遞系統(tǒng)，同時也是瘤排斥抗原的來源。瘤來源的外泌體（Exosome）能夠通過傳遞某些抑制信號，在機體免疫應(yīng)答過程中起負(fù)性調(diào)節(jié)作用，誘導(dǎo)瘤細(xì)胞形成免疫耐受，從而逃避免疫細(xì)胞的殺傷。外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細(xì)胞的增殖、再生和遷移等生理過程，在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用。

為獲得外泌體的大小、濃度、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息，可以通過電鏡、動態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀、蛋白質(zhì)免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細(xì)胞儀等對外泌體進(jìn)行表征。通過電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息，不同類型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同，得到的外泌體形態(tài)存在差異。例如，在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中，外泌體呈現(xiàn)囊泡獨有的茶托形，可能由于樣品在固定或染色過程中極度脫水，導(dǎo)致外泌體塌陷所致。與之相反，在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形，由于不會脫水變性，所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實狀態(tài)。另外，由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率，也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度、粒徑分布等信息。外泌體的復(fù)雜性，為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標(biāo)的診斷窗口。組織提取試劑盒原理

日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。dii染料標(biāo)記外泌體

研究者利用電穿孔法對外泌體進(jìn)行DOX的負(fù)載，進(jìn)行體內(nèi)抗中流效果的研究。實驗結(jié)果顯示，負(fù)載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對中流的抑制效果遠(yuǎn)優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX，其不僅水溶性低，而且容易使DOX與血液中的蛋白結(jié)合，從而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識別捕獲，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護(hù)DOX，可以提高DOX水溶性，避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉，提高靶向性，從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。dii染料標(biāo)記外泌體