CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實驗一：細胞活性檢測1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。CCK8雖好,這些情況下不建議用!浙江cck8統(tǒng)計方法小木蟲
注意事項1、細胞密度：MTT要檢測的只是細胞的增殖能力，所以不用保證孔內(nèi)細胞鋪板一定要均勻，只要保證孔與孔之間的細胞數(shù)量大致相同就可，也因此細胞重懸很重要。每孔加入之前，都需要吹打混勻細胞，但即便如此也很難保證每個孔的細胞數(shù)量大致一致。所以我們設(shè)置了6組實驗組，以便計算結(jié)果時可以有所取舍。2、對于MTT而言，預(yù)實驗很重要。預(yù)實驗要摸清楚兩點：a)細胞該如何稀釋；b)***濃度。網(wǎng)上很多人建議將細胞數(shù)稀釋到某個數(shù)值才是**合適的，但我認為只要保證每個孔內(nèi)的細胞數(shù)在70%左右，且各個孔內(nèi)細胞數(shù)量大致相同就可，不需要強求一定要達到某個數(shù)值，現(xiàn)實中，這一步需要多次摸索。北京cck8 空白組 1640將她培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
3、24小時后，吸出培養(yǎng)基，對照組和空白組每孔各加入100ul無血清培養(yǎng)基，實驗組每孔加入100ul基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制的***，繼續(xù)作用12或24小時；4、***作用完畢后，每孔加入50ulMTT,繼續(xù)作用4小時；5、棄掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或異丙醇。然后震蕩10分鐘，使孔底的紫色結(jié)晶充分溶解；6、在酶聯(lián)免疫機器上測定吸光度，波長為550nm或490nm。7、細胞存活率=（實驗組吸光度值-空白組吸光度值）/(對照組吸光度值-空白組吸光度值)***。
CCK-8（CellCountingKit-8）細胞活性和增殖檢測是醫(yī)學(xué)研究中常用的實驗技術(shù)，其原理是該試劑中含有WST-8，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。以下是CCK-8檢測的具體步驟：細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃，5%CO2的條件下)。化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).
細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。
MTT實驗操作
1、在96孔板中培養(yǎng)細胞，設(shè)置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：
2、在對照組和實驗組中，每孔加入細胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時； 加入CCK8那會空白對照組的細胞剛好長滿嗎？天津同仁 cck8
請問合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?浙江cck8統(tǒng)計方法小木蟲
二、優(yōu)點：·使用方便，省去了洗滌細胞，不需要放射性同位素和有機溶劑；·CCK-8法能快速檢測；·CCK-8法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細胞密度；·CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT法，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差；·CCK-8法對細胞毒性小，可以多次測定選取比較好測定時間，與MTT方法相比線性范圍更寬，靈敏度更高；·CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用。浙江cck8統(tǒng)計方法小木蟲