貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個時間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設(shè)置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧。3、加藥后的孵育時間，我的實驗摸了3個時間，24h，48h，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間。太長了就沒有必要了，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個問題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點文獻(xiàn)報道不一致。本人**終采用的是后者。CCK8的實驗步驟、實驗分組及檢測方法.浙江cck8材料
CKK-8原理
CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。
浙江cck8英文培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。
統(tǒng)一鋪好后，待細(xì)胞完全沉淀下來后，在顯微鏡下觀察各實驗組的細(xì)胞密度，如果密度不均勻，則固定一組，微調(diào)其他組細(xì)胞的量再次鋪板（如：發(fā)現(xiàn)NC組細(xì)胞較多，降低細(xì)胞量再次鋪板），放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.從鋪板后第二天開始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為100μl，則加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培養(yǎng)基為200μl，則加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。
細(xì)胞增殖實驗就是對細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細(xì)胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2、在對照組和實驗組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ulCCK8雖好,這些情況下不建議用!
CCK8的優(yōu)點：方法方便，不用洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；CCK-8快速檢測；CCK-8檢測靈敏度高，細(xì)胞密度低也可以檢測；CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法；CCK-8對細(xì)胞的毒性很小；CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑中是1瓶溶液，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，即開即用。CCK8的缺點：相比于與MTT法，CCK8的價格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。用途：***篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、**藥敏試驗。使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑.浙江cck8實驗統(tǒng)計學(xué)方法
CCK8系列簡稱終于來了.浙江cck8材料
CCK8，即Cell Counting Kit-8，與MTT法的主要區(qū)別如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。2、MTT法：其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。浙江cck8材料