簡(jiǎn)介：X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無(wú)動(dòng)物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑，兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，可用于轉(zhuǎn)染各類(lèi)真核細(xì)胞(包括昆蟲(chóng)細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢(shì)：1.簡(jiǎn)單易用的多組分混合試劑，無(wú)動(dòng)物源性成分，室溫穩(wěn)定。2.高轉(zhuǎn)染效率，對(duì)于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。3.使用細(xì)胞毒性低的試劑，結(jié)果相關(guān)性好.圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過(guò)X-tremeGENEHP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實(shí)驗(yàn)后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高于X-tremeGENEHP，導(dǎo)致存活細(xì)胞量減少(圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)).賽默飛提供了多種高質(zhì)量的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品，適用于各種細(xì)胞類(lèi)型的轉(zhuǎn)染。上海原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑梯度
轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進(jìn)行成像（左側(cè)四幅圖），A：LipoD293；B：293fectin；C：Xfect和D：Fugene6.帶有6xHis標(biāo)記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進(jìn)行Coomassie亮藍(lán)染色（右上圖E），道1為L(zhǎng)ipoD293293、道2為標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子、道3為Xfect、道4為293fectin和道5為Fugene6。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進(jìn)一步定量（見(jiàn)右下圖F）。產(chǎn)生慢***的比較通過(guò)LipoD293?試劑（升級(jí)版）和LipofectamineLTX（LTX）試劑將三個(gè)cDNAs共轉(zhuǎn)染進(jìn)293T細(xì)胞。一個(gè)GFP載體，pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來(lái)測(cè)定慢***的滴度。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細(xì)胞，其次是分別添加不同量的慢定都上清液，1微升（上圖）和10微升（下圖）。細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑選購(gòu)采用siRNA轉(zhuǎn)染試劑可以將siRNA輕松導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。
對(duì)CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較右圖：使用以上轉(zhuǎn)染試劑將編碼熒光素酶蛋白的cDNA（phRL-CMV）和綠色熒光蛋白GFP的cDNA按照生產(chǎn)商的提供的轉(zhuǎn)染步驟分別轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞。在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，熒光素酶的活性使用Beckman公司的化學(xué)發(fā)光監(jiān)測(cè)器測(cè)定；GFP陽(yáng)性細(xì)胞率使用BD公司的FACS檢測(cè)。左圖：LipoD293試劑（升級(jí)版）和Lipofecatmine2000（L2K）,TransIT以及Fugene6的價(jià)格比較（美元/1000微升）。所有的價(jià)格是從生產(chǎn)制造商的網(wǎng)站上收集對(duì)CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較右圖：使用以上轉(zhuǎn)染試劑將編碼熒
確定希望輸送的運(yùn)載物（如DNA、RNA或蛋白質(zhì)）根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)類(lèi)型，我們可能需要將不同的運(yùn)載物輸送到細(xì)胞內(nèi)部，包括**常見(jiàn)的DNA，用于基因編輯的siRNA，能夠更快表達(dá)蛋白的mRNA，CRISPR-Cas9甚至是體內(nèi)轉(zhuǎn)染。正確的了解您希望輸送的運(yùn)載物是選擇可靠轉(zhuǎn)染產(chǎn)品的第一步。2希望轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類(lèi)型轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類(lèi)型可簡(jiǎn)單分為兩大類(lèi)，連續(xù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞。連續(xù)細(xì)胞系具有無(wú)限增殖的潛能，通常要比原代或有限細(xì)胞更易處理。但由于此類(lèi)細(xì)胞經(jīng)歷過(guò)基因改變而變得具有無(wú)限增殖能力，它們?cè)谂囵B(yǎng)過(guò)程中的表現(xiàn)可能無(wú)法必然地反映體內(nèi)狀態(tài)。轉(zhuǎn)染產(chǎn)品知多少——siRNA轉(zhuǎn)染試劑.
在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞（原代大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞）轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由芝加哥大學(xué)肺和重癥護(hù)理系的NickolaiDulin博士友情提供制備大鼠的動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞并用使用LipoD293?試劑（左圖）和Lipofecatmine2000（L2K,右圖）分別將GFP的cDNA（pEGFP-N3）按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測(cè)GFP熒光，以此來(lái)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率。對(duì)難轉(zhuǎn)染細(xì)胞LNCap細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞（原代大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞）轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由羅斯威爾公園**研究所（RoswellCancerInstitute）試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實(shí)現(xiàn)靶向敲低。細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑選購(gòu)
轉(zhuǎn)染是將核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞中的過(guò)程，是細(xì)胞生物學(xué)、基因表達(dá)和基因***實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵步驟。上海原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑梯度
LNCap細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代嚴(yán)格由ATCC建議的操作步驟進(jìn)行，與pBabe-hygro-SSeCKs（1.5ug）和pEGFP-N3（1:1，共1.0微克）共轉(zhuǎn)染（6孔板中每孔的量），并用LipoD293?試劑（左圖）和FugeneHD（右圖）分別按照生產(chǎn)制造商的科學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測(cè)GFP熒光，以此來(lái)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率。在血清和***的存在下，HepG2和SaoS-2細(xì)胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達(dá)到95%的細(xì)胞融合。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，分別通過(guò)Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測(cè)效率。上海原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑梯度
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