3、24小時后，吸出培養(yǎng)基，對照組和空白組每孔各加入100ul無血清培養(yǎng)基，實驗組每孔加入100ul基礎培養(yǎng)基配制的***，繼續(xù)作用12或24小時；4、***作用完畢后，每孔加入50ulMTT,繼續(xù)作用4小時；5、棄掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或異丙醇。然后震蕩10分鐘，使孔底的紫色結(jié)晶充分溶解；6、在酶聯(lián)免疫機器上測定吸光度，波長為550nm或490nm。7、細胞存活率=（實驗組吸光度值-空白組吸光度值）/(對照組吸光度值-空白組吸光度值)***。**藥敏試驗：這個是用的比較廣的，我見過做**的團隊，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買。江蘇cck8數(shù)值
四、方法及步驟：實驗一：細胞增殖分析1、制備細胞懸液：細胞計數(shù)。2、接種到96孔板中：根據(jù)合適的鋪板細胞數(shù)（約1-2×104），每孔約100ul細胞懸液，同樣的樣本可做4-6個重復。3、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng)4小時，如果不需要貼壁，這步可以省去。4、加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議將***頭浸入培養(yǎng)液中加入且在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。或者直接配置含10%CCK8的培養(yǎng)基（現(xiàn)用現(xiàn)配），以換液的形式加入。江蘇cck8數(shù)值用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值.
貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個時間細胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧。3、加藥后的孵育時間，我的實驗摸了3個時間，24h，48h，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間。太長了就沒有必要了，細胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個問題：假設我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點文獻報道不一致。本人**終采用的是后者。
切記一定要使用無血清的基礎培養(yǎng)基，一是可以排除血清對細胞生長的影響；二是血清的存在會對吸光度的測量產(chǎn)生影響。以上是MTT比色法的介紹，MTT比色法因為涉及到吸出培養(yǎng)基溶解沉淀的操作，所以更適用于貼壁細胞，懸浮細胞比較好選用CCK8檢測細胞增殖，下面給大家介紹一下CCK8操作的注意事項。CCK8實驗操作CCK8的優(yōu)勢在于對細胞沒有毒性，可以直接加入細胞中長時間孵育，而不用考慮試劑本身對細胞帶來的影響。向各孔中加入10ul的CCK-8檢測溶液。如若檢測的細胞增殖或毒性試驗，需在此之前加入作用***培養(yǎng)適當時間，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8檢測液。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。
實驗原理：CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。CCK8的實驗步驟、實驗分組及檢測方法.上海cck8細胞
若細胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8.江蘇cck8數(shù)值
。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響：當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話，將會*****。懸浮細胞由于染色比較困難，一般需要增加細胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間。江蘇cck8數(shù)值