CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、細(xì)胞處理（不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。6、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8.江蘇cck8細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)分析
CCK-8沒(méi)有具體規(guī)定反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短，以具體反映比較好顯色的時(shí)間為主。因?yàn)椴煌募?xì)胞反應(yīng)時(shí)間、顯色標(biāo)準(zhǔn)都不一樣，所以一定要設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)。預(yù)實(shí)驗(yàn)中，可以先做幾個(gè)孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時(shí)間。3、懸浮細(xì)胞比貼壁細(xì)胞難顯色。在加入CCK-8培養(yǎng)后，可每隔一小時(shí)觀測(cè)一下顏色的變化情況，或者之間用酶標(biāo)儀檢測(cè)更為準(zhǔn)確。4、CCK8作用時(shí)間越長(zhǎng)，OD值就越大，所以對(duì)于作用時(shí)間也不是越長(zhǎng)久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求檢測(cè)孔內(nèi)不能有氣泡。上海cck8檢測(cè)ogd后細(xì)胞活性CCK8細(xì)胞增值檢測(cè)實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介.
在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450nm的吸光度作為空白對(duì)照。·金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10mM的話，將會(huì)*****。·懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。·加入CCK-8時(shí)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色或pH值已變化，建議換用新鮮的培養(yǎng)基。·用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定，且要擦拭干凈樣品板了。
沒(méi)有做過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）。都說(shuō)CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定，所以就用了這個(gè)試劑盒。CCK8的說(shuō)明書(shū)大家一定要認(rèn)真閱讀，里面很多細(xì)節(jié)的問(wèn)題都有提到。而且說(shuō)明書(shū)里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過(guò)的比較好數(shù)值。但無(wú)論如何，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件。你就算再懶，這個(gè)懶不得，否則你都只是在做無(wú)用功。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提，如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了。CCK8試驗(yàn)的總體實(shí)驗(yàn)心得.
cck8試劑加入后孵育時(shí)間，隨著時(shí)間的增加，OD值就會(huì)增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。
再說(shuō)一下關(guān)于種板設(shè)置問(wèn)題。眾所周知周圍一圈孔因?yàn)檫吘壭?yīng)都是不用來(lái)做實(shí)驗(yàn)的。一般每組樣品我會(huì)設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，得到的OD值去掉**大值與**小值，其余取平均值。我用的是排***，會(huì)省很多力氣，但是也會(huì)增大組內(nèi)誤差。這個(gè)只有通過(guò)校正移液***和選用**適***頭了。
能力有限，表達(dá)不清的大家湊合著看看吧。有疑問(wèn)的歡迎大家留言討論，我們的目標(biāo)是共同進(jìn)步，哈哈。 生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比.江蘇cck8細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)分析
細(xì)胞毒性測(cè)定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響，比如低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上。江蘇cck8細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)分析
實(shí)驗(yàn)材料及試劑
96 孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標(biāo)儀等；細(xì)胞、CCK8等。
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，每孔按 4×103個(gè)接種至 96 孔板中，每組設(shè)置8個(gè)復(fù)孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測(cè)液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后，用酶標(biāo)儀測(cè)波長(zhǎng)為450 nm的OD值。實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3 次， 取實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值作為**終實(shí)驗(yàn)結(jié)果。按公式計(jì)算生長(zhǎng)***率＝[(對(duì)照組 OD－實(shí)驗(yàn)組 OD)/對(duì)照組 OD] ×**，以分組為橫坐標(biāo)，生長(zhǎng)***率為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)***率柱狀圖。 江蘇cck8細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)分析