培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照。另外，血清不影響測定。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時，多加了這個***劑的濃度，CCK8細胞增殖實驗檢測原理.江蘇cck8圖
CCK-8（CellCountingKit-8）細胞活性和增殖檢測是醫(yī)學(xué)研究中常用的實驗技術(shù)，其原理是該試劑中含有WST-8，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。以下是CCK-8檢測的具體步驟：細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃，5%CO2的條件下)。江蘇cck8需要避光嗎CCK8系列簡稱終于來了.
CCK-8的用途1.細胞增殖測定：細胞增殖實驗在很多領(lǐng)域都會用到，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等。
2.***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時，經(jīng)常會用到CCK-8。
3.細胞毒性測定：這個可以和各個處理因素對細胞活性和增殖的影響，比如在UV、低氧或者什么化學(xué)物品對細胞的影響上。
4.**藥敏試驗：這個是用的比較廣的，我見過做**的團隊，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買，比如果子老師所在的團隊，哈哈哈。
5.微生物對細胞的毒性或增殖的實驗。
貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個時間細胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設(shè)置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧。3、加藥后的孵育時間，我的實驗摸了3個時間，24h，48h，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間。太長了就沒有必要了，細胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個問題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點文獻報道不一致。本人**終采用的是后者。5、cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。細胞增殖測定：細胞增殖實驗在很多領(lǐng)域都會用到，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等。
CCK8檢測原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、細胞處理（不同實驗處理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。5、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。6、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好.江蘇加cck8
細胞增殖檢測——CCK8.江蘇cck8圖
CCK法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較檢測方法MTT法XTT法WST-1法CCK法甲臜產(chǎn)物的水溶性差（需加有機溶劑溶解再檢測）好好好產(chǎn)品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用現(xiàn)配現(xiàn)用即開即用即開即用檢測靈敏度高很高很高高檢測時間較長較短較短**短檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細胞毒性高，細胞形態(tài)完全消失很低，細胞形態(tài)不變很低，細胞形態(tài)不變很低，細胞形態(tài)不變試劑穩(wěn)定性一般較差一般很好批量樣品檢測可以非常適合非常適合非常適合便捷程度一般便捷便捷非常便捷江蘇cck8圖