無血清培養(yǎng)基是用來在無血清條件下生長特殊類型的細胞或進行專門應用的培養(yǎng)基。一般是由基礎培養(yǎng)基和替代血清的補充因子組成。無血清培養(yǎng)基中沒有添加血清，但含有個別蛋白或大量蛋白組分。無血清培養(yǎng)基與無蛋白培養(yǎng)基的區(qū)別在于培養(yǎng)基中沒有添加蛋白，但含有一些動物或植物來源成分，如低分子量肽的水解物。還有一種化學限定培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中不含有蛋白、水解產物或未知結構的組分，所有成分均有已知的化學結構。***：1）未知組分少；2）培養(yǎng)基中不存在血清中的抗體、補體等成分，對培養(yǎng)細胞影響??；3）雜蛋白含量少，生產的產品后期處理較容易，例如*苗生產由于人用*苗需要純化減少雜蛋白，純化過程中成本消耗很大，*苗的損失...

圖15)和腫*影像結果(圖16)中可看到，來源于腫*細胞的熒光信號逐漸上升，小鼠逐漸死亡。g1組在26天達到中位生存期，在30天時全部死亡。g2組中，在51天達到中位生存期，在75天試驗結束時尚有2只存活。g3組中，在75天時有3只存活。g4組在61天**后一次成像檢測時6只皆存活，在75天時有5只存活。在整體存活率和腫*成像信號的比較上，聯(lián)合用*組的***效果數據都明顯優(yōu)于空白組和單獨用*組的。說明利妥昔單抗與本發(fā)明得到的nk細胞聯(lián)合使用時的體內adcc殺傷作用明顯。應用實例4nk細胞產品在肝細胞****上的臨床研究本研究選擇晚期肝細胞*(hepatocellularcarcinom...

同時也提高了抗體的利用率，通過優(yōu)化培養(yǎng)工藝可以減少原料抗體的使用量。本發(fā)明避免了原代細胞培養(yǎng)中起始原料細胞中的免*細胞，特別是巨噬細胞、單核細胞和nk細胞等，對目標細胞的adcp/adcc作用，提高了目標細胞的活率和**終產量。特別是當培養(yǎng)和擴增的目標細胞就是巨噬細胞、單核細胞和nk細胞等免*細胞時，終產品中目標細胞的純度和活力的提升更加明顯。本發(fā)明可以提供更高純度、更高活力的目標細胞產品，擴大了細胞產品在科學研究上的應用面，提高了細胞產品在臨床應用上的安全性和有效性。附圖說明圖1為改造實例1中抗人cd16的鼠igg1單克隆抗體3g8重鏈的改造示意圖；圖2為改造實例1中proteina...

本發(fā)明涉及分子生物學及細胞生物學技術領域：，特別是涉及一種細胞培養(yǎng)方法、改造抗體、細胞培養(yǎng)基、細胞產品及其應用。背景技術：：目前，常用的細胞體外培養(yǎng)方法大量應用了細胞培養(yǎng)用抗體來結合目標細胞表面的特定受體分子，以達到***(activating)或是**(blocking)信號通路的目的，促使目標細胞定向分化、持續(xù)擴增或凋亡。在小規(guī)模培養(yǎng)時，通常將這些抗體包被(coating)在培養(yǎng)皿表面，或是交聯(lián)到磁珠上。在大規(guī)模培養(yǎng)時，為了避免冗長的難以控制的包被過程，或是為了節(jié)省高昂的磁珠成本、避免引入外源物質，或是出于其他優(yōu)化工藝的目的，經常會將這些抗體直接加入培養(yǎng)基中。但是，這樣獲得的終產品...

本發(fā)明涉及間充質干細胞技術領域，具體是指一種間充質干細胞培養(yǎng)基用于化妝品的制備方法。背景技術：間充質干細胞(msc)是一類各種**中普遍存在的、與相應的**損傷的修復有著密切關系的一類異質性細胞，是修復*****的主要原料來源之一；mscs在體內生長過程中，會通過分泌一些細胞因子**的發(fā)展，并調節(jié)形成新生血管，促進血管形成、促進創(chuàng)傷**的細胞生長，參與創(chuàng)面的損傷修復，**終促進創(chuàng)面上皮化和肉芽**形成，實現(xiàn)加速創(chuàng)面愈合的進程；體外培養(yǎng)的msc所分泌的這些具有**損傷修復功能的生物活性分子，會釋放到培養(yǎng)上清中，這種培養(yǎng)上清收集后被稱為msc條件培養(yǎng)基。msc的條件培養(yǎng)基(mesenchy...

其他方法在一些實施方式中，還可以通過其他序列缺失、糖基化修飾和化學修飾等手段達到降低抗體與fc受體的親和力的目的。在一個推薦實施方式中，對抗體表達序列進行改造，表達和純化抗體的fab片段。在一個推薦實施方式中，對抗體表達序列中的n297進行突變，可以獲得重鏈無糖基化修飾的抗體(non-glycosylatedheavych**n，nghc)。在一個推薦實施方式中，用糖苷內切酶(endoglycosidase)對抗體進行處理，可以獲得糖基缺失或是糖基重排的抗體。在一個推薦實施方式中，用化學偶聯(lián)(conjugation)對抗體進行處理，可以獲得側鏈修飾或偶聯(lián)了形成空間位阻基團的抗體?？梢岳?..

sptrpleuasnglylysglu0tyrlyscyslysvalserasnlysalaleuaspserproileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleu0aspseraspglyserphepheleutyrserlysl

primer1-1fatcctttttctagtagcaactgcaaccggtgtacattctcaggttactctgaaagagtctgprimer1-1rctcaactctcttgtccaccttggtgctgctggcprimer1-2fgccagcagcaccaaggtggacaagagagttgagprimer1-2rgggcttgccggccgtcgcactcatttacccagagacagggaprimer1-3fctatcgattgaattccaccatgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaact純化獲得的pcr產物在經過限制性內切酶e...

吸去孵育液，加入試劑盒提供的洗液400ul/孔，洗滌3次，吸干洗液后，加入200ul/孔sdf-1α結合物，500rpm水平搖床室溫孵育2小時；⑤重復步驟③中的洗滌步驟，徹底吸干殘留洗液；⑥加入200ul/孔底物顯色液，室溫、避光反應30分鐘后，每孔加入50ul終止液，于450nm波長(使用570nm作為校正波長)讀取結果。⑦根據所測od值，結合標準品的標準曲線(表1)，確定樣品中的sdf-1α的含量(表2)。⑧檢測結果：見附圖2。表1sdf-1alpha測定標準曲線的測定兩個樣品msc-cm1和msc-cm2測定的od值及根據標準曲線線性回歸公式所計算的sdf-1α在相應樣品中的含量...

本文所使用的術語“和/或”包括一個或多個相關的所列項目的任意的和所有的組合。對本發(fā)明中涉及的各名詞解釋如下：細胞培養(yǎng)用抗體：泛指用于細胞培養(yǎng)過程中使用的抗體。原型抗體：指的是常用的市售的細胞培養(yǎng)用抗體，尚未經過本發(fā)明所涉及的改造。改造抗體：特指本發(fā)明中將原型抗體進行蛋白質改造后的抗體，其與fc受體的親和力低于原型抗體與fc受體的親和力。培養(yǎng)體系一般指的是包括培養(yǎng)基、生長因子、細胞培養(yǎng)用抗體、細胞(目標細胞和非目標細胞)、血清(有或無)、***(有或無)、其他添加成分的**，但并不限于此，根據不同的需要則培養(yǎng)體系的組成也不同。細胞表面的抗體受體、抗體***和抗體依賴的殺傷某些細胞，例如淋...

同時也提高了抗體的利用率，通過優(yōu)化培養(yǎng)工藝可以減少原料抗體的使用量。本發(fā)明避免了原代細胞培養(yǎng)中起始原料細胞中的免*細胞，特別是巨噬細胞、單核細胞和nk細胞等，對目標細胞的adcp/adcc作用，提高了目標細胞的活率和**終產量。特別是當培養(yǎng)和擴增的目標細胞就是巨噬細胞、單核細胞和nk細胞等免*細胞時，終產品中目標細胞的純度和活力的提升更加明顯。本發(fā)明可以提供更高純度、更高活力的目標細胞產品，擴大了細胞產品在科學研究上的應用面，提高了細胞產品在臨床應用上的安全性和有效性。附圖說明圖1為改造實例1中抗人cd16的鼠igg1單克隆抗體3g8重鏈的改造示意圖；圖2為改造實例1中proteina...

這類自我adcp/adcc作用會快速降低目標細胞的活率、純度和活力，并使得目標細胞提前進入耗竭期?？贵w改造原理和方法igg上與fcγr結合的部位集中在鉸鏈區(qū)(hinge)和fc-ch2結構域，對抗體的改造主要涉及這個區(qū)域。改造的方式包括序列替換、點突變、序列插入、序列缺失、糖基化修飾和化學修飾中的一種或多種。例如將細胞培養(yǎng)用抗體的鉸鏈區(qū)和fc段替換為與fc受體結合力相對弱的抗體亞型的鉸鏈區(qū)和fc段，或對細胞培養(yǎng)用抗體的鉸鏈區(qū)和fc段上關鍵結合部位的氨基酸殘基進行突變，或是將細胞培養(yǎng)用抗體的互補決定區(qū)(complementarity-determiningregions，cdr)插入到與...

并在調節(jié)細胞內環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+在細胞外液中的作用是將**內部細胞之間相互粘著，在細胞內參與許多重要的細胞生理活動，如傳導、參與肌肉細胞收縮等。在懸浮培養(yǎng)時，為了減少細胞的聚集和附著，要減少Ca2+的濃度。Mg2+是構成細胞間質的重要成分，對于細胞間相互穩(wěn)定結合有很重要的意義。磷的化合物對細胞物質代謝和生理功能調控有重要作用。其他成分：肽、核苷、嘌呤等?？蓭椭毎目寺』囵B(yǎng)及維持某些特殊細胞系的生長。營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基是維持細胞活性及高密度生長的基礎，營養(yǎng)缺乏容易引起細胞凋亡，新生牛血清中所含大部分營養(yǎng)成分可以通過化學成分明確的營養(yǎng)物質如氨基酸維生素等成分組合取代...

細胞培養(yǎng)是一項重要的實驗技術，用于研究細胞的生長、分化和功能。下面將介紹一般的細胞培養(yǎng)流程，以幫助您理解和掌握這一技術。首先，準備培養(yǎng)基是細胞培養(yǎng)的基礎。培養(yǎng)基是一種含有營養(yǎng)物質和生長因子的液體，提供細胞所需的養(yǎng)分和環(huán)境。常用的培養(yǎng)基有DMEM、RPMI-164等。在制備培養(yǎng)基時，需要按照配方將各種成分溶解在無菌水中，并進行濾。接下來，需要將細胞轉移到培養(yǎng)皿中。首先，將培養(yǎng)皿放入無菌工作臺中，使用無菌技術將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中。然后，將細胞懸液加入培養(yǎng)皿中，使細胞均勻分布在培養(yǎng)基中。通常，細胞密度應根據實驗要求進行調整，以確保細胞能夠正常生長。在細胞培養(yǎng)過程中，需要定期檢查細胞的生長...

空心圓圈)，原型抗體okt3的ed50為130ng/ml(圖8，實心圓)，說明目標細胞t細胞對acd3-sh更加敏感。同時，在飽和抗體濃度下，acd3-sh的**大擴增信號也明顯強于okt3的。結果顯示，改造抗體acd3-sh明顯具有更高的激發(fā)t細胞擴增的活力。培養(yǎng)實例2nkt細胞培養(yǎng)及抗人cd3抗體的擴增活力檢測本測試分別用改造實例3中獲得的改造抗體acd3-sh和其原型抗體okt3來刺激人pbmc中nkt細胞(cd3+cd56+)的增殖，通過對細胞計數來比較活力。材料人靜脈血，基礎培養(yǎng)基gt-t551(takara，wk551t)，擴增培養(yǎng)基(gt-t551，il-21000iu/...

細胞培養(yǎng)，看似簡單的一個實驗，卻不知道把多少英雄豪杰折磨的意欲“自掛東南枝”~***科研小助手就為大家盤點一下細胞復蘇、傳代到凍存的一些步驟和注意事項，希望廣大科研汪能與細胞愉快的玩耍！細胞復蘇細胞復蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。具體操作：一.實驗前準備：1.將水浴鍋預熱至37℃2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。二．細胞復蘇培養(yǎng)：1.根據細胞凍存記錄取出需要復蘇的細胞。2.迅...

已發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的血清濃度減少時，這些成分都是必需的。既使在使用血清的情況下，這些成分也可幫助細胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細胞系的生長。***和生長因子在大多數常規(guī)培養(yǎng)基的配方中都沒有注明，但在無血清培養(yǎng)基中通常要加入它們，用其來代替血清中的***能增加多種不同類型細胞的貼瓶率；生長因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF－1和IGF－2及白介素等，生長因子和細胞因子有著***的特異性，一般與***或其它物質起相互協(xié)同或加成作用。另一種常見的添加物就是血清替代物，目前已有許多可完全或部分替代傳統(tǒng)培養(yǎng)液中血清成分的商業(yè)產品，其穩(wěn)定性較好，但批次間仍有差別，產品的成分也不很確定。干粉...

如、糖尿病足等)和皮膚**老為目的的化妝品中，吸引了眾多的研究者開發(fā)新的方法與技術，提高msc-cm的產量，增強其生物學功能，降低產品制備的成本。研究表明鋰離子是一種雙向調節(jié)的化合物，實驗動物的研究表明適量的鋰元素有助于骨質的形成，同時適量的鋰元素對于神經細胞也具有保護作用，培養(yǎng)基中低濃度的鋰離子可以促進msc的增殖，而高濃度的鋰離子則會**msc的增殖與分化。普遍認為，鋰離子有助于骨質形成與神經保護作用是由于鋰離子促進了msc的增殖和分化，而對于是否鋰離子的使用使msc所分泌的活性因子有所增加，改善了細胞生長的微環(huán)境，目前未見報道。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中添加低濃度的氯化鋰將有助...

改造實例3抗人cd3細胞培養(yǎng)抗體的改造本實施例將抗人cd3的小鼠igg2a單抗okt3的cdr序列插入到改造實例2的igg1骨架上，然后進行表達和純化，得到改造抗體acd3-sh。將okt3輕鏈和重鏈的蛋白質序列與higg1-kappa(κ)輕鏈和higg1重鏈的分別進行序列比對(圖6a，b)，確認6個cdr序列?；瘜W合成經過密碼子優(yōu)化后的cdr表達dna序列，通過重疊pcr等基因工程方法進行拼接，獲得用于表達輕鏈的質粒pm-okt3h-lc(圖6c)和包含改造實例2中4個點突變的用于表達重鏈的質粒pma-okt3h-hc(圖6d)。在293f細胞中表達，經過proteina親和層析、...

artificialsequence)1glnvalthrleulysgluserglyproglyileleuglnprosergln151015thrleuserleuthrcysserpheserglypheserleuargthrser202530glymetglyvalglytrpileargglnproserglylysglyleuglu354045trpleualahisiletrptrpaspaspasplysargtyrasnproala505560leulysserargleuthrileserlysaspthrserserasnglnval65707580phel

注射用重組人白介素-2)，基礎培養(yǎng)基x-vivo5(lonza，04-418q)，完全培養(yǎng)基(x-vivo5，il-21000iu/ml)，celltiteraqueousonesolution(promega，g3580，即mts溶液)，okt3(takarabio，t210)。準備抗體濃度梯度取96孔平底細胞培養(yǎng)板，在孔內加入100μl完全培養(yǎng)基。用完全培養(yǎng)基稀釋抗體至μg/ml，在第1列孔內各加入100μl，混勻。從第1列向第11列孔內做梯度稀釋(serialdilution)，即轉移100μl，混勻后，繼續(xù)向下一列轉移。**后，每個孔內含100μl完全培養(yǎng)基，并形成了抗體的1:...

本發(fā)明涉及間充質干細胞技術領域，具體是指一種間充質干細胞培養(yǎng)基用于化妝品的制備方法。背景技術：間充質干細胞(msc)是一類各種**中普遍存在的、與相應的**損傷的修復有著密切關系的一類異質性細胞，是修復*****的主要原料來源之一；mscs在體內生長過程中，會通過分泌一些細胞因子**的發(fā)展，并調節(jié)形成新生血管，促進血管形成、促進創(chuàng)傷**的細胞生長，參與創(chuàng)面的損傷修復，**終促進創(chuàng)面上皮化和肉芽**形成，實現(xiàn)加速創(chuàng)面愈合的進程；體外培養(yǎng)的msc所分泌的這些具有**損傷修復功能的生物活性分子，會釋放到培養(yǎng)上清中，這種培養(yǎng)上清收集后被稱為msc條件培養(yǎng)基。msc的條件培養(yǎng)基(mesenchy...

SLM)和DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細胞、BHK21細胞和CHO細胞，新生牛血清用量可以從10％降至3％，減少新生牛血清使用批次和批間差的影響，減少生物制品純化損失，減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來干擾和差異的風險，提高制品安全性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶、3L轉瓶、15L轉瓶及生物反應器中培養(yǎng)細胞，在*苗生產中可以達到低血清高密度的培養(yǎng)效果。低血清培養(yǎng)基營養(yǎng)成分優(yōu)于基礎培養(yǎng)基，易使細胞增殖迅速，代謝旺盛，代謝產物對細胞有不良影響，易產生細胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當增加換液次數，增加傳代頻率。獲取同樣的細胞量，用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時間，...

培養(yǎng)至第12～20天收獲細胞，計數。結果討論在一個為期12天的試驗中，志愿者1(do**)的pbmc在使用acd3-sh時可以擴增(圖9a，空心圓圈)，而使用okt3時可以擴增(圖9a，實心圓)。在對志愿者2(donor2)pbmc的19天擴增試驗中，分別是491倍和251倍(圖9b)。結果顯示，改造抗體acd3-sh具有更高的激發(fā)nkt細胞擴增的活力。培養(yǎng)實例3nk細胞特異性擴增和純度檢測本測試取志愿者提供的血樣，分離pbmc后平均分為2份，分別用改造獲得的改造抗體acd3-sh、acd16-sh和acd52-sh(試驗組)和原型抗體okt3、acd16-3g8和campath-1h...

552851)、apc-cy7mouseanti-human-cd16(bdbiosciences，557758)、pemouseanti-human-cd56(bdbiosciences，555516)進行流式細胞檢測。結果討論試驗組擴增獲得的細胞中cd3-cd56+的nk細胞占比為％(圖10a)，高于對照組獲得的％(圖10b)。在這群細胞中，cd3-cd16+cd56+的nk細胞占比分別是％(圖10c)和％(圖10d)。那么，在總細胞群中，利用試驗組擴增獲得的cd3-cd16+cd56+的nk細胞可達到總細胞的％，優(yōu)于用對照組獲得的％。結果顯示，利用試驗組抗體獲得的nk細胞產品的純...

artificialsequence)3glnvalglnleuglnglnserglyalagluleualaargproglyala151015servallysmetsercyslysthrserglytyrthrphethrargtyr202530thrmethistrpvallysglnargproglyglnglyleuglutrpile354045glytyrileasnproserargglytyrthrasntyrasnglnlysphe505560lysasplysalathrleuthrthrasplysserserserthralatyr65707580metg

動物細胞培養(yǎng)（animalcellculture）就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。細胞培養(yǎng)基的種類有哪些？按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。DMEM（Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium）是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎上改良獲得的，各成分份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）兩種類型。細胞生長快。附著稍差的**...

已發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的血清濃度減少時，這些成分都是必需的。既使在使用血清的情況下，這些成分也可幫助細胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細胞系的生長。***和生長因子在大多數常規(guī)培養(yǎng)基的配方中都沒有注明，但在無血清培養(yǎng)基中通常要加入它們，用其來代替血清中的***能增加多種不同類型細胞的貼瓶率；生長因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF－1和IGF－2及白介素等，生長因子和細胞因子有著***的特異性，一般與***或其它物質起相互協(xié)同或加成作用。另一種常見的添加物就是血清替代物，目前已有許多可完全或部分替代傳統(tǒng)培養(yǎng)液中血清成分的商業(yè)產品，其穩(wěn)定性較好，但批次間仍有差別，產品的成分也不很確定。干粉...

相對便宜，失敗率低，但易造成營養(yǎng)成分的流失。高壓**某些培養(yǎng)基（如MEM）可進行高壓**，例如清大天一的MEM培養(yǎng)基中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，可在高壓**后加入。另外可高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺為保證高壓**的效果，**設備的驗證很關鍵，可高壓**的培養(yǎng)基在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達到**效果及營養(yǎng)成分的**小損失，因此不需將**時間延長。**大多數培養(yǎng)基采用～μm孔徑的微孔濾膜進行過濾**，并且已成為培養(yǎng)基**的發(fā)展方向，它可低限度地減少培養(yǎng)基的營養(yǎng)損失。細胞培養(yǎng)液的儲存條件一般為2－8℃、...

一般情況下應調pH比所需值低～，因過濾**后，pH值會升高約。8）在細胞培養(yǎng)過程中，建議不加或加少量的***，如血清的濃度較低則所加***的量也要相應降低一些。9）建議用1NHCl或1NNaOH來調節(jié)培養(yǎng)基的pH，因為用碳酸氫鈉來調對培養(yǎng)液的滲透壓影響比較大。如下圖所示：圖6-1MEM培養(yǎng)基（SLM，MD611）在pH值相同情況下所加的碳酸氫鈉、氫氧化鈉的量及所對應的培養(yǎng)液滲透壓圖6-2199培養(yǎng)基（MD502）在pH值相同情況下所加的碳酸氫鈉、氫氧化鈉的量及所對應的培養(yǎng)液滲透壓培養(yǎng)基**培養(yǎng)基的**方法主要有兩種，高壓**及um微孔濾膜過濾**。與過濾相比，高壓**的工作強度小，相對...