霉菌數(shù)每1g不得超過50個。稱取樣品1g,加入無菌純化水10mL溶解,混勻即得試樣。按中華******典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行,檢查項目為**數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。這是一個性能特性表述的要求。細胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類動物細胞,因此經(jīng)過細胞培養(yǎng)效果的檢驗是產(chǎn)品***劣的直觀表述,這也是很多生物制*用戶要求的一項指標。目前國內(nèi)尚無細胞培養(yǎng)和計數(shù)的法定方法,可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術》中細胞計數(shù)法論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進行細胞培養(yǎng),前四天用含10%小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)并計數(shù),檢查細胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力。后三天用不含小牛...
7)溶液應在2℃-8℃下避光保存。具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說明書。2)配制可高壓**細胞培養(yǎng)基(1)根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下,并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解。(2)在121℃、15psi下**15分鐘。(3)待溶液冷卻至室溫,加入無菌mol/LL-谷氨酰胺溶液規(guī)定體積、無菌%(w/v)碳酸氫鈉溶液規(guī)定體積,加注射用水(20℃~30℃)至規(guī)定體積,混勻。(4)如果必要,用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。(5)溶液應在2℃-8℃下避光保存。具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的...
按中華******典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測定法進行。滲透壓溶劑通過半透膜由低濃度向高濃度溶液擴散的現(xiàn)象稱為滲透,阻止?jié)B透所需施加的壓力,稱為滲透壓。細胞必須生活在等滲環(huán)境中,動物細胞借助K+、Na+維持滲透平衡。大多數(shù)細胞對滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過高容易使細胞脫水萎縮,培養(yǎng)液滲透壓過低容易使細胞膨脹破裂,因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華******典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法進行。**內(nèi)*****內(nèi)***是許多病原性**所產(chǎn)生的***。它的特殊性在于不是**或**的代謝產(chǎn)物,而是**死亡或解體后才釋放出來的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基...
傳代后的細胞取其中一部分進行間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基的制備,其余細胞以2x106/ml的密度進行凍存;(5)間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基(msc-cm)的制備:取第四次傳代的細胞,將細胞以1x105/ml的密度分別接種于1號培養(yǎng)基和2號培養(yǎng)基中,待細胞在兩種培養(yǎng)基中生長至90%融合度,小心棄去培養(yǎng)上清,加入適量1xhbss溶液(對于10cm細胞培養(yǎng)皿,可加入10ml-15mlhbss溶液)清洗細胞兩次,徹底吸干殘留的hbss溶液,加入無血清的高糖dmem培養(yǎng)基,于溫度為37℃、二氧化碳濃度為5%的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72h后,將2種細胞培養(yǎng)上清分別收集于50ml離心管中,1000g離心10分鐘,去...
圖9為培養(yǎng)實例2中原型抗體okt3與改造實例3制備的acd3-sh對nkt細胞擴增的曲線圖;圖10為培養(yǎng)實例3中采用改造抗體組擴增獲得的細胞與采用原型抗體組擴增獲得的細胞的流式細胞分析圖;圖11為應用實例1中試驗組nk細胞產(chǎn)品和對照組nk細胞產(chǎn)品對raji細胞的殺傷試驗結(jié)果圖;圖12為應用實例1中試驗組nk細胞產(chǎn)品和對照組nk細胞產(chǎn)品對bt-474細胞的殺傷試驗結(jié)果圖;圖13為應用實例1中試驗組nk細胞產(chǎn)品和對照組nk細胞產(chǎn)品對mcf7細胞的殺傷試驗結(jié)果圖;圖14為應用實例2中兩組小鼠體內(nèi)的腫*成像信號強度圖;圖15為應用實例3中各組小鼠的存活曲線圖;圖16為應用實例3中各組小鼠的腫*...
收集細胞后用培養(yǎng)基調(diào)整密度到1e5/ml,在96孔板的各孔內(nèi)加入100μl。收集nk細胞,用培養(yǎng)基調(diào)整密度到1e5/ml或是5e5/ml,在相應的孔內(nèi)加入100μl。利妥昔單抗ritu***mab用培養(yǎng)基濃度調(diào)整到2mg/ml,在相應的孔內(nèi)加入5μl。曲妥珠單抗trastuzumab用培養(yǎng)基濃度調(diào)整到2mg/ml,在相應的孔內(nèi)加入5μl。按試劑盒說明書準備細胞自發(fā)釋放孔(*含raji、bt-474、mcf7或nk一種細胞)、靶細胞**大釋放孔(*含raji、bt-474或mcf7細胞一種細胞)、體積校正孔(不含任何細胞)。準備對靶細胞殺傷試驗孔(raji+nk、bt-474+nk、或是...
其重鏈序列見seqid**。改造實例2抗人cd52細胞培養(yǎng)抗體的改造本實施例將表達抗人cd52的人源化的igg1型campath-1h單抗的序列進行突變,然后進行表達和純化,得到改造抗體acd52-sh。如圖4所示,以表達campath-1h單抗重鏈的序列(圖4a)為模板,利用引物對primer2-3f/primer2-arr、primer2-arf/primer2-dsr、primer2-dsf/primer2-3r分別進行pcr獲得3個片段后,再通過重疊pcr進行拼接。引物對序列如下表所示。如圖4b,純化獲得的pcr產(chǎn)物在經(jīng)過限制性內(nèi)切酶ecori(gaattc)和naei(gcc...
lnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysargvalgluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproalaproglualaarggly0glyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluaspprogluva
平衡鹽溶液(balancedsaltsolution,BSS)簡稱鹽溶液,集緩沖液的緩沖能力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營養(yǎng)供應特點于一體,兼具維持滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度、同時供給細胞生存所必需的能量和無機離子成分的作用。各種BSS的緩沖系統(tǒng)有所不同,其中以Hank’s液和Earle’s液為例,它們主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的pH值。Eagles液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hank’s液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存**,需要用Earle’s液...
特別是l235的側(cè)鏈與fcγriii的疏水相互作用。在一些推薦實施方式中,將l235突變?yōu)槠渌被?,特別是帶電荷的氨基酸(谷氨酸glu,天冬氨酸asp,精氨酸arg,賴氨酸lys)或是存在空間位阻的大基團側(cè)鏈氨基酸(苯丙氨酸phe等),可以減弱抗體與fc受體的結(jié)合。在一些推薦實施方式中,將l234突變?yōu)槠渌被?,特別是影響主鏈構(gòu)象的氨基酸(甘氨酸gly,脯氨酸pro),可以減弱抗體與fc受體的結(jié)合。higg1的p329參與了與hfcγriii的結(jié)合,特別是與fcγriii的疏水相互作用。在一些推薦實施方式中,將p329突變?yōu)槠渌被?,特別是帶電荷的氨基酸或是不帶電荷的極性氨基酸(...
空心圓圈),原型抗體okt3的ed50為130ng/ml(圖8,實心圓),說明目標細胞t細胞對acd3-sh更加敏感。同時,在飽和抗體濃度下,acd3-sh的**大擴增信號也明顯強于okt3的。結(jié)果顯示,改造抗體acd3-sh明顯具有更高的激發(fā)t細胞擴增的活力。培養(yǎng)實例2nkt細胞培養(yǎng)及抗人cd3抗體的擴增活力檢測本測試分別用改造實例3中獲得的改造抗體acd3-sh和其原型抗體okt3來刺激人pbmc中nkt細胞(cd3+cd56+)的增殖,通過對細胞計數(shù)來比較活力。材料人靜脈血,基礎培養(yǎng)基gt-t551(takara,wk551t),擴增培養(yǎng)基(gt-t551,il-21000iu/...
一、抗體改造改造實例1抗人cd16細胞培養(yǎng)抗體的改造本實施例將表達抗人cd16的鼠igg1單克隆抗體3g8的vh-ch1段序列與表達人igg4的ch2-ch3段序列拼接,然后與抗體3g8的輕鏈序列一起進行表達和純化,得到改造抗體acd16-sh。選擇小鼠igg1-ch1上一段(t214kvdk218)與人igg4-ch1上的相同的序列進行抗體序列的拼接,即在t214之前的序列為小鼠igg1-3g8的序列,在k218之后的序列為人igg4的序列。同時使用了人cd33的信號肽序列。首先,如圖1所示,用引物對primer1-1f/primer1-1r對鼠3g8抗體重鏈表達dna序列進行擴增,...
導致細胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效??刂萍毎囵B(yǎng)基中**和霉菌,是延長細胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華******典》2005版二部附錄第100頁的口服給*制劑的微生物限度標準,并嚴于該標準,規(guī)定細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的**數(shù)每1g不得超過200個,霉菌數(shù)每1g不得超過50個。稱取樣品1g,加入無菌純化水10mL溶解,混勻即得試樣。按中華******典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行,檢查項目為**數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。細胞生長試驗這是一個性能特性表述的要求。細胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類動物細胞,因此經(jīng)過細胞培養(yǎng)效果的檢驗是產(chǎn)品***劣的直觀表述,這也是很多生物制*用...
空心圓圈),原型抗體okt3的ed50為130ng/ml(圖8,實心圓),說明目標細胞t細胞對acd3-sh更加敏感。同時,在飽和抗體濃度下,acd3-sh的**大擴增信號也明顯強于okt3的。結(jié)果顯示,改造抗體acd3-sh明顯具有更高的激發(fā)t細胞擴增的活力。培養(yǎng)實例2nkt細胞培養(yǎng)及抗人cd3抗體的擴增活力檢測本測試分別用改造實例3中獲得的改造抗體acd3-sh和其原型抗體okt3來刺激人pbmc中nkt細胞(cd3+cd56+)的增殖,通過對細胞計數(shù)來比較活力。材料人靜脈血,基礎培養(yǎng)基gt-t551(takara,wk551t),擴增培養(yǎng)基(gt-t551,il-21000iu/...
然后是肝部,在一些推薦實施方式中,上述免*細胞產(chǎn)品用于肺*和肝*的***。nk細胞表面富表達fcγriii(cd16),是adcc作用的主要效應細胞。在一些實施方式中,nk細胞可與***用抗體聯(lián)合用于adcc殺傷研究。在一些推薦實施方式中,nk細胞產(chǎn)品可與***用抗體利妥昔單抗ritu***mab聯(lián)合用于淋巴*的***。在一些推薦實施方式中,nk細胞產(chǎn)品可與***用抗體曲妥珠單抗trastuzumab聯(lián)合用于乳腺*和胃*的***。在一些推薦實施方式中,nk細胞產(chǎn)品可與***用抗體西妥昔單抗cetu***mab聯(lián)合用于頭頸部*和結(jié)直腸*的***。nk細胞還可以通過非自我或是自失效應(mi...
一般情況下應調(diào)pH比所需值低~,因過濾**后,pH值會升高約。8)在細胞培養(yǎng)過程中,建議不加或加少量的***,如血清的濃度較低則所加***的量也要相應降低一些。9)建議用1NHCl或1NNaOH來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,因為用碳酸氫鈉來調(diào)對培養(yǎng)液的滲透壓影響比較大。如下圖所示:圖6-1MEM培養(yǎng)基(SLM,MD611)在pH值相同情況下所加的碳酸氫鈉、氫氧化鈉的量及所對應的培養(yǎng)液滲透壓圖6-2199培養(yǎng)基(MD502)在pH值相同情況下所加的碳酸氫鈉、氫氧化鈉的量及所對應的培養(yǎng)液滲透壓培養(yǎng)基**培養(yǎng)基的**方法主要有兩種,高壓**及um微孔濾膜過濾**。與過濾相比,高壓**的工作強度小,相對...
按中華******典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測定法進行。滲透壓溶劑通過半透膜由低濃度向高濃度溶液擴散的現(xiàn)象稱為滲透,阻止?jié)B透所需施加的壓力,稱為滲透壓。細胞必須生活在等滲環(huán)境中,動物細胞借助K+、Na+維持滲透平衡。大多數(shù)細胞對滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過高容易使細胞脫水萎縮,培養(yǎng)液滲透壓過低容易使細胞膨脹破裂,因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華******典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法進行。**內(nèi)*****內(nèi)***是許多病原性**所產(chǎn)生的***。它的特殊性在于不是**或**的代謝產(chǎn)物,而是**死亡或解體后才釋放出來的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基...
加入無菌-谷氨酰胺溶液規(guī)定體積、無菌%(w/v)碳酸氫鈉溶液規(guī)定體積,加注射用水(20℃~30℃)至規(guī)定體積,混勻。(4)如果必要,用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。(5)溶液應在2℃-8℃下避光保存。具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說明書1)細胞培養(yǎng)用水一般為三蒸水(經(jīng)石英蒸餾器蒸餾)或超純水,醫(yī)*生產(chǎn)上一般為注射用水。2)建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用,因為包裝一旦打開,組分可能會變質(zhì)或因受潮而結(jié)團。3)溶解干粉培養(yǎng)基時先加入終體積90%-95%的培養(yǎng)用水,添加劑加完后再補足。4)如需添加的組分較多時,某一組分完全溶解后,再添加另一組分。5)...
收集細胞后用培養(yǎng)基調(diào)整密度到1e5/ml,在96孔板的各孔內(nèi)加入100μl。收集nk細胞,用培養(yǎng)基調(diào)整密度到1e5/ml或是5e5/ml,在相應的孔內(nèi)加入100μl。利妥昔單抗ritu***mab用培養(yǎng)基濃度調(diào)整到2mg/ml,在相應的孔內(nèi)加入5μl。曲妥珠單抗trastuzumab用培養(yǎng)基濃度調(diào)整到2mg/ml,在相應的孔內(nèi)加入5μl。按試劑盒說明書準備細胞自發(fā)釋放孔(*含raji、bt-474、mcf7或nk一種細胞)、靶細胞**大釋放孔(*含raji、bt-474或mcf7細胞一種細胞)、體積校正孔(不含任何細胞)。準備對靶細胞殺傷試驗孔(raji+nk、bt-474+nk、或是...
一、抗體改造改造實例1抗人cd16細胞培養(yǎng)抗體的改造本實施例將表達抗人cd16的鼠igg1單克隆抗體3g8的vh-ch1段序列與表達人igg4的ch2-ch3段序列拼接,然后與抗體3g8的輕鏈序列一起進行表達和純化,得到改造抗體acd16-sh。選擇小鼠igg1-ch1上一段(t214kvdk218)與人igg4-ch1上的相同的序列進行抗體序列的拼接,即在t214之前的序列為小鼠igg1-3g8的序列,在k218之后的序列為人igg4的序列。同時使用了人cd33的信號肽序列。首先,如圖1所示,用引物對primer1-1f/primer1-1r對鼠3g8抗體重鏈表達dna序列進行擴增,...
同時也提高了抗體的利用率,通過優(yōu)化培養(yǎng)工藝可以減少原料抗體的使用量。本發(fā)明避免了原代細胞培養(yǎng)中起始原料細胞中的免*細胞,特別是巨噬細胞、單核細胞和nk細胞等,對目標細胞的adcp/adcc作用,提高了目標細胞的活率和**終產(chǎn)量。特別是當培養(yǎng)和擴增的目標細胞就是巨噬細胞、單核細胞和nk細胞等免*細胞時,終產(chǎn)品中目標細胞的純度和活力的提升更加明顯。本發(fā)明可以提供更高純度、更高活力的目標細胞產(chǎn)品,擴大了細胞產(chǎn)品在科學研究上的應用面,提高了細胞產(chǎn)品在臨床應用上的安全性和有效性。附圖說明圖1為改造實例1中抗人cd16的鼠igg1單克隆抗體3g8重鏈的改造示意圖;圖2為改造實例1中proteina...
空心圓圈),原型抗體okt3的ed50為130ng/ml(圖8,實心圓),說明目標細胞t細胞對acd3-sh更加敏感。同時,在飽和抗體濃度下,acd3-sh的**大擴增信號也明顯強于okt3的。結(jié)果顯示,改造抗體acd3-sh明顯具有更高的激發(fā)t細胞擴增的活力。培養(yǎng)實例2nkt細胞培養(yǎng)及抗人cd3抗體的擴增活力檢測本測試分別用改造實例3中獲得的改造抗體acd3-sh和其原型抗體okt3來刺激人pbmc中nkt細胞(cd3+cd56+)的增殖,通過對細胞計數(shù)來比較活力。材料人靜脈血,基礎培養(yǎng)基gt-t551(takara,wk551t),擴增培養(yǎng)基(gt-t551,il-21000iu/...
圖9為培養(yǎng)實例2中原型抗體okt3與改造實例3制備的acd3-sh對nkt細胞擴增的曲線圖;圖10為培養(yǎng)實例3中采用改造抗體組擴增獲得的細胞與采用原型抗體組擴增獲得的細胞的流式細胞分析圖;圖11為應用實例1中試驗組nk細胞產(chǎn)品和對照組nk細胞產(chǎn)品對raji細胞的殺傷試驗結(jié)果圖;圖12為應用實例1中試驗組nk細胞產(chǎn)品和對照組nk細胞產(chǎn)品對bt-474細胞的殺傷試驗結(jié)果圖;圖13為應用實例1中試驗組nk細胞產(chǎn)品和對照組nk細胞產(chǎn)品對mcf7細胞的殺傷試驗結(jié)果圖;圖14為應用實例2中兩組小鼠體內(nèi)的腫*成像信號強度圖;圖15為應用實例3中各組小鼠的存活曲線圖;圖16為應用實例3中各組小鼠的腫*...
改造抗體的重鏈氨基酸序列如seqid**所示;或改造抗體的重鏈氨基酸序列如;或改造抗體的重鏈氨基酸序列如,輕鏈氨基酸序列如。可以理解,本發(fā)明的改造抗體不限于以上幾種,只要是經(jīng)過蛋白質(zhì)改造降低了與fc受體的親和力的細胞培養(yǎng)用抗體均可。細胞培養(yǎng)本發(fā)明一個實施方式的細胞培養(yǎng)方法,包括以下步驟:在培養(yǎng)體系中添加改造抗體;所述改造抗體為將互補決定區(qū)以外的區(qū)域經(jīng)過蛋白質(zhì)改造的細胞培養(yǎng)用抗體,所述改造抗體與fc受體的親和力低于未經(jīng)過蛋白質(zhì)改造的細胞培養(yǎng)用抗體與fc受體的親和力。在一些實施方式中,細胞類型為淋巴細胞、粒細胞、肥大細胞、dc細胞、巨噬細胞、單核細胞和血小板中的一種或多種。所述的細胞來源于...
本發(fā)明涉及間充質(zhì)干細胞技術領域,具體是指一種間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基用于化妝品的制備方法。背景技術:間充質(zhì)干細胞(msc)是一類各種**中普遍存在的、與相應的**損傷的修復有著密切關系的一類異質(zhì)性細胞,是修復*****的主要原料來源之一;mscs在體內(nèi)生長過程中,會通過分泌一些細胞因子**的發(fā)展,并調(diào)節(jié)形成新生血管,促進血管形成、促進創(chuàng)傷**的細胞生長,參與創(chuàng)面的損傷修復,**終促進創(chuàng)面上皮化和肉芽**形成,實現(xiàn)加速創(chuàng)面愈合的進程;體外培養(yǎng)的msc所分泌的這些具有**損傷修復功能的生物活性分子,會釋放到培養(yǎng)上清中,這種培養(yǎng)上清收集后被稱為msc條件培養(yǎng)基。msc的條件培養(yǎng)基(mesenchy...
本文所使用的術語“和/或”包括一個或多個相關的所列項目的任意的和所有的組合。對本發(fā)明中涉及的各名詞解釋如下:細胞培養(yǎng)用抗體:泛指用于細胞培養(yǎng)過程中使用的抗體。原型抗體:指的是常用的市售的細胞培養(yǎng)用抗體,尚未經(jīng)過本發(fā)明所涉及的改造。改造抗體:特指本發(fā)明中將原型抗體進行蛋白質(zhì)改造后的抗體,其與fc受體的親和力低于原型抗體與fc受體的親和力。培養(yǎng)體系一般指的是包括培養(yǎng)基、生長因子、細胞培養(yǎng)用抗體、細胞(目標細胞和非目標細胞)、血清(有或無)、***(有或無)、其他添加成分的**,但并不限于此,根據(jù)不同的需要則培養(yǎng)體系的組成也不同。細胞表面的抗體受體、抗體***和抗體依賴的殺傷某些細胞,例如淋...
改造實例3抗人cd3細胞培養(yǎng)抗體的改造本實施例將抗人cd3的小鼠igg2a單抗okt3的cdr序列插入到改造實例2的igg1骨架上,然后進行表達和純化,得到改造抗體acd3-sh。將okt3輕鏈和重鏈的蛋白質(zhì)序列與higg1-kappa(κ)輕鏈和higg1重鏈的分別進行序列比對(圖6a,b),確認6個cdr序列?;瘜W合成經(jīng)過密碼子優(yōu)化后的cdr表達dna序列,通過重疊pcr等基因工程方法進行拼接,獲得用于表達輕鏈的質(zhì)粒pm-okt3h-lc(圖6c)和包含改造實例2中4個點突變的用于表達重鏈的質(zhì)粒pma-okt3h-hc(圖6d)。在293f細胞中表達,經(jīng)過proteina親和層析、...
改造抗體的重鏈氨基酸序列如seqid**所示;或改造抗體的重鏈氨基酸序列如;或改造抗體的重鏈氨基酸序列如,輕鏈氨基酸序列如??梢岳斫猓景l(fā)明的改造抗體不限于以上幾種,只要是經(jīng)過蛋白質(zhì)改造降低了與fc受體的親和力的細胞培養(yǎng)用抗體均可。細胞培養(yǎng)本發(fā)明一個實施方式的細胞培養(yǎng)方法,包括以下步驟:在培養(yǎng)體系中添加改造抗體;所述改造抗體為將互補決定區(qū)以外的區(qū)域經(jīng)過蛋白質(zhì)改造的細胞培養(yǎng)用抗體,所述改造抗體與fc受體的親和力低于未經(jīng)過蛋白質(zhì)改造的細胞培養(yǎng)用抗體與fc受體的親和力。在一些實施方式中,細胞類型為淋巴細胞、粒細胞、肥大細胞、dc細胞、巨噬細胞、單核細胞和血小板中的一種或多種。所述的細胞來源于...
收集細胞后用培養(yǎng)基調(diào)整密度到1e5/ml,在96孔板的各孔內(nèi)加入100μl。收集nk細胞,用培養(yǎng)基調(diào)整密度到1e5/ml或是5e5/ml,在相應的孔內(nèi)加入100μl。利妥昔單抗ritu***mab用培養(yǎng)基濃度調(diào)整到2mg/ml,在相應的孔內(nèi)加入5μl。曲妥珠單抗trastuzumab用培養(yǎng)基濃度調(diào)整到2mg/ml,在相應的孔內(nèi)加入5μl。按試劑盒說明書準備細胞自發(fā)釋放孔(*含raji、bt-474、mcf7或nk一種細胞)、靶細胞**大釋放孔(*含raji、bt-474或mcf7細胞一種細胞)、體積校正孔(不含任何細胞)。準備對靶細胞殺傷試驗孔(raji+nk、bt-474+nk、或是...
7)溶液應在2℃-8℃下避光保存。具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說明書。2)配制可高壓**細胞培養(yǎng)基(1)根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下,并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解。(2)在121℃、15psi下**15分鐘。(3)待溶液冷卻至室溫,加入無菌mol/LL-谷氨酰胺溶液規(guī)定體積、無菌%(w/v)碳酸氫鈉溶液規(guī)定體積,加注射用水(20℃~30℃)至規(guī)定體積,混勻。(4)如果必要,用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。(5)溶液應在2℃-8℃下避光保存。具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的...