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7)溶液應(yīng)在2℃-8℃下避光保存。具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說(shuō)明書。2)配制可高壓**細(xì)胞培養(yǎng)基(1)根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下,并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解。(2)在121℃、15psi下**15分鐘。(3)待溶液冷卻至室溫,加入無(wú)菌mol/LL-谷氨酰胺溶液規(guī)定體積、無(wú)菌%(w/v)碳酸氫鈉溶液規(guī)定體積,加注射用水(20℃~30℃)至規(guī)定體積,混勻。(4)如果必要,用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。(5)溶液應(yīng)在2℃-8℃下避光保存。具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說(shuō)明書。注意事項(xiàng)1)細(xì)胞培養(yǎng)用水一般為三蒸水(經(jīng)石英蒸餾器蒸餾)或超純水,醫(yī)*生產(chǎn)上一般為注射用水。2)建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用,因?yàn)榘b一旦打開,組分可能會(huì)變質(zhì)或因受潮而結(jié)團(tuán)。3)溶解干粉培養(yǎng)基時(shí)先加入終體積90%-95%的培養(yǎng)用水,添加劑加完后再補(bǔ)足。4)如需添加的組分較多時(shí),某一組分完全溶解后,再添加另一組分。5)待培養(yǎng)基完全溶解后再加入碳酸氫鈉,以免產(chǎn)生沉淀。6)所有成分完全溶解后,培養(yǎng)基應(yīng)立即過(guò)濾或高壓**,以免產(chǎn)生沉淀或有微生物污染。7)在過(guò)濾**時(shí)。無(wú)酚紅培養(yǎng)基確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。中國(guó)澳門無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基哪家好
lnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysargvalgluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproalaproglualaarggly0glyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasngly0lysglutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuaspserproileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpropro0valleuaspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserproglylys4503449prt人工序列。青海F12細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商家DMEM高糖培養(yǎng)基能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的快速增殖。
包括以下步驟:在培養(yǎng)體系中添加改造抗體;所述改造抗體為將互補(bǔ)決定區(qū)以外的區(qū)域經(jīng)過(guò)蛋白質(zhì)改造的細(xì)胞培養(yǎng)用抗體,所述改造抗體與fc受體的親和力低于未經(jīng)過(guò)蛋白質(zhì)改造的細(xì)胞培養(yǎng)用抗體與fc受體的親和力。本發(fā)明還披露了一種改造抗體,所述改造抗體為將互補(bǔ)決定區(qū)以外的區(qū)域經(jīng)過(guò)蛋白質(zhì)改造的細(xì)胞培養(yǎng)用抗體,所述改造抗體與fc受體的親和力低于未經(jīng)過(guò)蛋白質(zhì)改造的細(xì)胞培養(yǎng)用抗體與fc受體的親和力。本發(fā)明還披露了一種細(xì)胞培養(yǎng)基,包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基和所述改造抗體。本發(fā)明還披露了一種細(xì)胞產(chǎn)品,所述細(xì)胞產(chǎn)品為根據(jù)上述細(xì)胞培養(yǎng)方法得到的細(xì)胞產(chǎn)品。本發(fā)明還披露了一種上述細(xì)胞產(chǎn)品在制備對(duì)腫*細(xì)胞具有殺傷作用的*物和試劑中的應(yīng)用。本發(fā)明還披露了一種用于*癥***的*物,包括上述細(xì)胞產(chǎn)品。本發(fā)明還披露了一種用于異體細(xì)胞***的*物,包括上述細(xì)胞產(chǎn)品?;谏鲜黾夹g(shù)方案,本發(fā)明具有以下有益效果:該發(fā)明適用于已建立的細(xì)胞培養(yǎng)工藝,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)用抗體的原有機(jī)制沒(méi)有變動(dòng),對(duì)培養(yǎng)工藝不需要做大的改動(dòng)。特別適合目前***使用的大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)工藝中將細(xì)胞培養(yǎng)用抗體直接加入培養(yǎng)基的情況,操作簡(jiǎn)便。本發(fā)明可以提高細(xì)胞培養(yǎng)用抗體在細(xì)胞培養(yǎng)體系中的穩(wěn)定性。
圖9為培養(yǎng)實(shí)例2中原型抗體okt3與改造實(shí)例3制備的acd3-sh對(duì)nkt細(xì)胞擴(kuò)增的曲線圖;圖10為培養(yǎng)實(shí)例3中采用改造抗體組擴(kuò)增獲得的細(xì)胞與采用原型抗體組擴(kuò)增獲得的細(xì)胞的流式細(xì)胞分析圖;圖11為應(yīng)用實(shí)例1中試驗(yàn)組nk細(xì)胞產(chǎn)品和對(duì)照組nk細(xì)胞產(chǎn)品對(duì)raji細(xì)胞的殺傷試驗(yàn)結(jié)果圖;圖12為應(yīng)用實(shí)例1中試驗(yàn)組nk細(xì)胞產(chǎn)品和對(duì)照組nk細(xì)胞產(chǎn)品對(duì)bt-474細(xì)胞的殺傷試驗(yàn)結(jié)果圖;圖13為應(yīng)用實(shí)例1中試驗(yàn)組nk細(xì)胞產(chǎn)品和對(duì)照組nk細(xì)胞產(chǎn)品對(duì)mcf7細(xì)胞的殺傷試驗(yàn)結(jié)果圖;圖14為應(yīng)用實(shí)例2中兩組小鼠體內(nèi)的腫*成像信號(hào)強(qiáng)度圖;圖15為應(yīng)用實(shí)例3中各組小鼠的存活曲線圖;圖16為應(yīng)用實(shí)例3中各組小鼠的腫*成像圖。具體實(shí)施方式為了便于理解本發(fā)明,下面將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更***的描述,并給出了本發(fā)明的較佳實(shí)施例。但是,本發(fā)明可以以許多不同的形式來(lái)實(shí)現(xiàn),并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地,提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開內(nèi)容的理解更加透徹***。除非另有定義,本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域:的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說(shuō)明書中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的,不是旨在于限制本發(fā)明。1640培養(yǎng)基提供了充足的生長(zhǎng)因子。
用以降低msc在體外培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生的細(xì)胞分化,提高其所分泌的生物活性分子的分泌能力,提高msc-cm中有效成分的產(chǎn)量,在**佳的使用條件下,msc-cm促進(jìn)人**成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的滴度提高了5-10倍,不僅間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基中不含有活細(xì)胞,在使用細(xì)胞時(shí)沒(méi)有免*排斥、潛在的致*性、不易保存與運(yùn)輸?shù)热秉c(diǎn),提高了使用效果,而且提高了間充質(zhì)干細(xì)胞的利用,降低了間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備成本;利用含有本**的化妝品可用于皮膚損傷及老化的修復(fù),所指的皮膚損傷包括但不限于外傷造成的皮膚損傷、慢性疾病造成的皮膚損傷(如糖尿病足等)以及年齡增長(zhǎng)所造成的皮膚老化等現(xiàn)象進(jìn)行修復(fù),提高了使用效果。作為改進(jìn),所述(1)中青/鏈霉素混合液的終濃度為100ug/ml。作為改進(jìn),所述(5)中的高糖dmem含青霉素(100u/ml)/鏈霉素(100ug/ml),并添加以下相應(yīng)成分:**酸鈉(1mm)、非必須氨基酸(10um)、l-谷氨酰胺(2mm)、巰基乙醇(55um)、上表皮生長(zhǎng)因素(10ng/ml)和氯化鋰母液(80ug/ml)。作為改進(jìn),所述1號(hào)培養(yǎng)基和2號(hào)培養(yǎng)基的容積為500ml。作為改進(jìn),一種間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基,其通過(guò)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法制備。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。上海MEM細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商
DMEM高糖培養(yǎng)基提供了良好的培養(yǎng)環(huán)境。中國(guó)澳門無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基哪家好
空心圓圈),原型抗體okt3的ed50為130ng/ml(圖8,實(shí)心圓),說(shuō)明目標(biāo)細(xì)胞t細(xì)胞對(duì)acd3-sh更加敏感。同時(shí),在飽和抗體濃度下,acd3-sh的**大擴(kuò)增信號(hào)也明顯強(qiáng)于okt3的。結(jié)果顯示,改造抗體acd3-sh明顯具有更高的激發(fā)t細(xì)胞擴(kuò)增的活力。培養(yǎng)實(shí)例2nkt細(xì)胞培養(yǎng)及抗人cd3抗體的擴(kuò)增活力檢測(cè)本測(cè)試分別用改造實(shí)例3中獲得的改造抗體acd3-sh和其原型抗體okt3來(lái)刺激人pbmc中nkt細(xì)胞(cd3+cd56+)的增殖,通過(guò)對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)比較活力。材料人靜脈血,基礎(chǔ)培養(yǎng)基gt-t551(takara,wk551t),擴(kuò)增培養(yǎng)基(gt-t551,il-21000iu/ml),細(xì)胞培養(yǎng)瓶t75(corning,430720)/t175(corning,431080),ifn-γ(上海凱茂,注射用重組人干擾素γ伽瑪)。細(xì)胞培養(yǎng)和檢測(cè)方法利用白細(xì)胞分離液分離人pbmc細(xì)胞,用基礎(chǔ)培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度至2e6/ml,置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。在37℃、5%co2培養(yǎng)2小時(shí),以使單核細(xì)胞貼壁。收集懸浮細(xì)胞,用基礎(chǔ)培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度至1e6/ml。加入重組人ifn-γ(1000iu/ml)。在37℃、5%co2培養(yǎng)24小時(shí)。加入抗人cd3抗體(30ng/ml)和il-2(1000iu/ml),繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。按照1:1體積比例添加擴(kuò)增培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。之后每隔48小時(shí)取樣計(jì)數(shù),用擴(kuò)增培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度至,繼續(xù)培養(yǎng)。中國(guó)澳門無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基哪家好