免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)通常包括以下幾個關(guān)鍵步驟： 1. 目標(biāo)蛋白質(zhì)的選擇： 2. 抗體的選擇：選擇特異性強(qiáng)、親和力高的抗體來捕獲目標(biāo)蛋白質(zhì) 3. 樣本的準(zhǔn)備：收集和準(zhǔn)備細(xì)胞或組織樣本。 4. 蛋白質(zhì)的裂解和釋放：選擇合適的裂解條件，如pH值、離子強(qiáng)度、去污劑等。 5. 蛋白質(zhì)濃度的測定：確定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度，以便于后續(xù)步驟的標(biāo)準(zhǔn)化。 6. 免疫沉淀的操作：將特異性抗體與裂解液混合，并在適宜的條件下孵育，以形成抗體-抗原復(fù)合物。 7. 非特異性結(jié)合的減少：通過預(yù)純化步驟去除可能的非特異性...

免疫沉淀實(shí)驗(yàn)不同于WB實(shí)驗(yàn)的樣品制備，對實(shí)驗(yàn)樣品制備要求更高，除了要控制所有操作盡量在冰上完成外，關(guān)鍵的是裂解液的成分，裂解液成分直接決定了樣品質(zhì)量。 主要影響： 1. 蛋白的釋放：許多目的蛋白定位在細(xì)胞器，質(zhì)膜，細(xì)胞核，細(xì)胞骨架中，但通常這些亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)很難被裂解液有效溶解，所以很難將這些蛋白釋放出來。 2. 蛋白相互作用：不同去垢劑對不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)間相互作用影響程度不同，一些互作較弱的蛋白對盡管在比較溫和的裂解液配方中仍然會被破壞。 免疫沉淀Co-IP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠？蘇州anti Flag免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨 免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭?..

RIP實(shí)驗(yàn)步驟通常包括： 1. 細(xì)胞收集與交聯(lián)：培養(yǎng)細(xì)胞至適當(dāng)密度。使用交聯(lián)劑（如甲醛）進(jìn)行交聯(lián)，以固定蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。 2. 細(xì)胞裂解：收集細(xì)胞并進(jìn)行裂解，釋放RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物。在裂解過程中添加蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解。 3. 超聲處理：使用超聲波破壞細(xì)胞，獲得更小的染色質(zhì)片段，這有助于后續(xù)步驟中抗體的接觸。 4. 除去細(xì)胞碎片：通過離心去除細(xì)胞碎片和未裂解的細(xì)胞，收集含RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物的上清液。 5. 免疫沉淀：將針對特定RNA結(jié)合蛋白（RBP）的抗體加入到上清液中。孵育一段時間，使抗體與目標(biāo)蛋白充分結(jié)合。 6. 捕獲免疫復(fù)合物：添...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）在生物醫(yī)學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用，以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域： 1. 蛋白質(zhì)相互作用研究：IP技術(shù)可以用來研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，揭示蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成和蛋白質(zhì)之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)。 2. 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究：通過IP技術(shù)，可以富集信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，研究信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制和調(diào)控[。 3. 蛋白質(zhì)修飾研究：IP技術(shù)可以用于富集經(jīng)過特定修飾的蛋白質(zhì)，例如磷酸化、乙?；?，進(jìn)而研究蛋白質(zhì)修飾的功能和調(diào)控。 4. 藥物靶點(diǎn)篩選：IP技術(shù)可以用于富集藥物靶點(diǎn)蛋白質(zhì)，幫助篩選潛在的藥物靶點(diǎn)。 5. 疾病機(jī)制研究：通...

免疫沉淀IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。 與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。 簡而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，可重復(fù)...

免疫沉淀實(shí)驗(yàn)不同于WB實(shí)驗(yàn)的樣品制備，對實(shí)驗(yàn)樣品制備要求更高，除了要控制所有操作盡量在冰上完成外，關(guān)鍵的是裂解液的成分，裂解液成分直接決定了樣品質(zhì)量。 主要影響： 1. 蛋白的釋放：許多目的蛋白定位在細(xì)胞器，質(zhì)膜，細(xì)胞核，細(xì)胞骨架中，但通常這些亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)很難被裂解液有效溶解，所以很難將這些蛋白釋放出來。 2. 蛋白相互作用：不同去垢劑對不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)間相互作用影響程度不同，一些互作較弱的蛋白對盡管在比較溫和的裂解液配方中仍然會被破壞。 免疫沉淀技術(shù)IP的應(yīng)用有哪些？溫州anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠應(yīng)用 免疫沉淀（Co-IP）實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w...

ChIP技術(shù)的應(yīng)用： 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究DNA甲基化對基因表達(dá)的影響。 4. 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能：研究染色質(zhì)重塑對基因表達(dá)和細(xì)胞功能的影響。 5. 疾病相關(guān)基因的調(diào)控：研究疾病狀態(tài)下基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化。 ChIP技術(shù)是表觀遺傳學(xué)研究中的一個重要工具，它可以幫助科學(xué)家們理解基因表達(dá)是如何在分子水平上被精確調(diào)控的。 免疫沉淀IP抗體的選擇？廣州RIP免疫沉淀磁珠價格...

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免疫沉淀純化所得抗原純度低一般有多種原因： 1. 非特異性蛋白污染 如果洗脫所得抗原純度較低，則有幾種方法可以進(jìn)行優(yōu)化。在結(jié)合或洗滌緩沖液中加入去污劑或其他可以降低非特異性結(jié)合的組分。使用普通微珠預(yù)純化樣本還可以降低非目標(biāo)分子的共純化。此外，還可以使用無關(guān)蛋白 (如BSA) 封閉微珠 。 2. 抗體污染 使用蛋白A、G或A/G的經(jīng)典免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中會出現(xiàn)抗體與抗原共洗脫的情況。如果共洗脫會影響下游分析，則需要使用抗體通過共價連接固定至微珠的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如Pierce 直接 IP 或交聯(lián) IP 的形式。 免疫沉淀RIP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠？北京RIP免疫沉淀磁珠多少...

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Co-IP的實(shí)驗(yàn)步驟： 1. 細(xì)胞裂解：首先，細(xì)胞或組織被裂解，釋放其中的蛋白質(zhì)。 2. 抗體結(jié)合：然后，將特異性抗體（針對已知蛋白質(zhì)之一的抗體）加入到裂解物中。這些抗體會特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白（誘餌蛋白）上。 3. 免疫復(fù)合物形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物。 4. 沉淀：接著，使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來捕獲免疫復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合，從而拉下抗體以及與之結(jié)合的目標(biāo)蛋白和任何相關(guān)的相互作用蛋白。 5. 洗滌：捕獲的免疫復(fù)合物被洗滌以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。 6. 洗脫和分析：免疫復(fù)合物被洗脫...

免疫共沉淀分析（Co-IP）實(shí)驗(yàn)原理與IP十分類似，基本的技術(shù)都是采用目標(biāo)抗原特異性的固相化抗體；但I(xiàn)P的目標(biāo)是純化單一抗原，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。 在Co-IP實(shí)驗(yàn)中，已知抗原稱為誘餌蛋白，與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等，蛋白間相互作用強(qiáng)度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間?；镜腃o-IP實(shí)驗(yàn)方案與IP相同，實(shí)際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是，還有許多其他因素需要考慮，例如，結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化，優(yōu)化時，需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強(qiáng)度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。 免疫沉淀技術(shù)Ch...

Co-IP的優(yōu)勢： 1. 生理相關(guān)性：Co-IP可以在接近生理?xiàng)l件的條件下捕獲蛋白質(zhì)相互作用。 2. 特異性：使用特異性抗體可以提高實(shí)驗(yàn)的特異性。 3. 廣泛應(yīng)用：Co-IP技術(shù)適用于多種樣本類型，包括細(xì)胞培養(yǎng)、組織樣本等。 Co-IP的局限性： 1. 抗體依賴性：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能得到假陽性或假陰性結(jié)果。 2. 非特異性結(jié)合：可能存在非特異性結(jié)合問題，需要仔細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和對照來控制。 3. 技術(shù)挑戰(zhàn)：對于低豐度或弱相互作用的蛋白質(zhì)，Co-IP可能面臨技術(shù)挑戰(zhàn)。 免疫沉淀技術(shù)IP實(shí)驗(yàn)步驟。RIP免疫沉淀磁珠價格 免疫沉淀技術(shù)（Imm...

ChIP實(shí)驗(yàn)的基本步驟包括： 1. 交聯(lián)（Crosslinking）：細(xì)胞被甲醛等交聯(lián)劑處理，使得蛋白質(zhì)和DNA之間的相互作用被固定，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 2. 細(xì)胞裂解：裂解細(xì)胞，釋放染色質(zhì)，同時保持蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的完整性。 3. 超聲或酶解：通過超聲或酶解將染色質(zhì)切割成較小的片段，以便于后續(xù)步驟中的免疫沉淀。 4. 免疫沉淀（Immunoprecipitation）：加入針對特定組蛋白修飾或轉(zhuǎn)錄因子的抗體，這些抗體會特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白質(zhì)上。 5. 捕獲復(fù)合物：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子捕獲抗體-蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 6. 洗...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用和純化特定蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法。 優(yōu)點(diǎn): 1. 特異性強(qiáng)：利用特異性抗體捕獲目標(biāo)蛋白，可以有效地從復(fù)雜的生物樣本中分離出感興趣的蛋白質(zhì)。 2. 靈敏度高：可以檢測到低豐度的蛋白質(zhì)，包括瞬態(tài)或弱相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合物。 3. 應(yīng)用范圍廣：適用于多種生物樣本，如細(xì)胞裂解物、組織提取物和生物流體。 4. 生物學(xué)洞察深入：能夠揭示蛋白質(zhì)之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)，有助于理解細(xì)胞內(nèi)的信號傳遞和調(diào)控機(jī)制。 5. 可與其他技術(shù)聯(lián)用：如與質(zhì)譜（IP-MS）聯(lián)用，可以準(zhǔn)確鑒定蛋白質(zhì)及其相互作用伙...

免疫沉淀技術(shù)RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的實(shí)驗(yàn)方法基于以下幾個關(guān)鍵步驟： 1. 細(xì)胞裂解：首先，細(xì)胞或組織樣本被裂解，以釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和RNA復(fù)合物。 2.抗體特異性結(jié)合：裂解后的樣本中加入針對特定RNA結(jié)合蛋白的抗體。這些抗體能夠特異性地識別并結(jié)合到目標(biāo)蛋白。 3. 免疫復(fù)合物形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后，形成抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。 4. 親和介質(zhì)捕獲：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來捕獲這些抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合，從而拉下與之結(jié)合的復(fù)合物。 ...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種利用抗體與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，從復(fù)雜樣本中分離和純化目標(biāo)蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法。這項(xiàng)技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用場景，以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域： 1. 蛋白質(zhì)相互作用分析：通過免疫沉淀技術(shù)，研究人員可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，揭示蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成以及它們在細(xì)胞內(nèi)的功能和調(diào)控機(jī)制。 2. 抗體藥物開發(fā)：免疫沉淀技術(shù)可以用于研究抗體藥物與其靶標(biāo)蛋白的結(jié)合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性，指導(dǎo)抗體藥物的設(shè)計(jì)和優(yōu)化。 3. 蛋白質(zhì)表達(dá)水平分析：通過比較不同條件下的免疫沉淀結(jié)果，可以評估目標(biāo)蛋白的相對量，進(jìn)...

ChIP實(shí)驗(yàn)的基本步驟包括： 1. 交聯(lián)（Crosslinking）：細(xì)胞被甲醛等交聯(lián)劑處理，使得蛋白質(zhì)和DNA之間的相互作用被固定，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 2. 細(xì)胞裂解：裂解細(xì)胞，釋放染色質(zhì)，同時保持蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的完整性。 3. 超聲或酶解：通過超聲或酶解將染色質(zhì)切割成較小的片段，以便于后續(xù)步驟中的免疫沉淀。 4. 免疫沉淀（Immunoprecipitation）：加入針對特定組蛋白修飾或轉(zhuǎn)錄因子的抗體，這些抗體會特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白質(zhì)上。 5. 捕獲復(fù)合物：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子捕獲抗體-蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 6. 洗...

免疫沉淀是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。免疫沉淀是一種生物學(xué)技術(shù)，它利用抗體的特異性結(jié)合特性來富集和分離混合物中的特定蛋白質(zhì)。這種技術(shù)是研究蛋白質(zhì)表達(dá)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)修飾和蛋白質(zhì)功能的強(qiáng)大工具。免疫沉淀技術(shù)RIP的...

免疫沉淀是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。免疫沉淀是一種生物學(xué)技術(shù)，它利用抗體的特異性結(jié)合特性來富集和分離混合物中的特定蛋白質(zhì)。這種技術(shù)是研究蛋白質(zhì)表達(dá)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)修飾和蛋白質(zhì)功能的強(qiáng)大工具。免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)設(shè)...

免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。 1. 特異性：抗體應(yīng)當(dāng)對目標(biāo)蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 2. 親和力：抗體對目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高，以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。 3. 抗體類型：單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實(shí)驗(yàn)。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性，而多克隆抗體可能提供更強(qiáng)的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。 4. 應(yīng)用驗(yàn)證：選擇已經(jīng)過免疫沉淀（IP）或相關(guān)應(yīng)用（如Western blot, IHC）驗(yàn)證的抗體，這增加了實(shí)驗(yàn)成功的可能性。...

免疫沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。 與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。 簡而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)復(fù)合物組成以及特定蛋白質(zhì)的表達(dá)和純化的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 基本原理 免疫沉淀技術(shù)基于抗體與特定蛋白質(zhì)（抗原）之間的特異性相互作用。通過使用針對目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性抗體，可以從含有多種蛋白質(zhì)的復(fù)雜樣本中捕獲并富集目標(biāo)蛋白質(zhì)。 免疫沉淀技術(shù)有多種類型，包括： 1. 個別免疫沉淀法（Individual IP） 2. 免疫共沉淀法（Co-IP） 3. 染色質(zhì)免疫沉淀法（ChIP） 4. RNA免疫沉淀法（RIP） 近年來，免疫沉淀技術(shù)在固相支持物的選擇上有了很大...

免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟： 1. 樣本準(zhǔn)備 2. 細(xì)胞裂解：使用裂解緩沖液（含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解）裂解細(xì)胞，釋放蛋白質(zhì)。 3. 蛋白質(zhì)濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。 4. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。 5. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)充分結(jié)合。 6. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation，簡稱IP）是一種生物化學(xué)方法，它利用特異性抗體對抗原進(jìn)行親和純化。在含有目的抗原的細(xì)胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A/G-Beads（預(yù)先將Protein A/G固定結(jié)合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、Protein A/G與抗體的Fc的特異性，形成“抗原-抗體-Protein A/G-Beads”復(fù)合物，清洗離心后去除溶液中未結(jié)合的雜蛋白，檢測是否存在目的蛋白。 免疫沉淀技術(shù)常用于從細(xì)胞或組織裂解物中分離用于免疫印跡檢測或其他檢測技術(shù)的蛋白和其他生物分子。它的目標(biāo)是分離足夠用于Western Blot或其他檢測方法檢測...

ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）實(shí)驗(yàn)是一種用于研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù)。以下是ChIP實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法概述： 1. 交聯(lián)：將細(xì)胞與交聯(lián)劑（如1%甲醛）孵育，通常在室溫下進(jìn)行10-15分鐘。 2. 終止交聯(lián)：添加甘氨酸以終止交聯(lián)反應(yīng)，孵育5分鐘。 3. 收集細(xì)胞：通過離心收集細(xì)胞，并用PBS洗滌以去除交聯(lián)劑。 4. 細(xì)胞裂解：使用裂解緩沖液裂解細(xì)胞，釋放染色質(zhì)。 5. 染色質(zhì)剪切：使用超聲波或酶消化將染色質(zhì)剪切成適當(dāng)大小的片段。 6. 免疫沉淀：將剪切后的染色質(zhì)與特異性抗體孵育，然后添加蛋白A/G磁珠。 7. 洗滌：用低鹽、高鹽和LiCl洗滌液洗滌磁...

免疫沉淀（RIP）實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。 1. 特異性：抗體應(yīng)當(dāng)對目標(biāo)蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 2. 親和力：抗體對目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高，以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。 3. 抗體類型：單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實(shí)驗(yàn)。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性，而多克隆抗體可能提供更強(qiáng)的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。 4. 應(yīng)用驗(yàn)證：選擇已經(jīng)過免疫沉淀（RIP）或相關(guān)應(yīng)用（如Western blot, IHC）驗(yàn)證的抗體，這增加了實(shí)驗(yàn)成功的可能...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟： 1. 樣本準(zhǔn)備 2. 蛋白質(zhì)濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。 3. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。 4. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)充分結(jié)合。 5. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。 6. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，...

免疫沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。 與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。 簡而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，...

ChIP技術(shù)的應(yīng)用： 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究DNA甲基化對基因表達(dá)的影響。 4. 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能：研究染色質(zhì)重塑對基因表達(dá)和細(xì)胞功能的影響。 5. 疾病相關(guān)基因的調(diào)控：研究疾病狀態(tài)下基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化。 ChIP技術(shù)是表觀遺傳學(xué)研究中的一個重要工具，它可以幫助科學(xué)家們理解基因表達(dá)是如何在分子水平上被精確調(diào)控的。 免疫沉淀技術(shù)ChIP的原理是什么？IP免疫沉淀磁珠...