免疫沉淀IP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。 與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。 簡而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強，而磁珠在得率，可重復(fù)...

免疫沉淀RIP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。 與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。 簡而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強，而磁珠在得率，可重...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種利用抗體與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，從復(fù)雜樣本中分離和純化目標蛋白質(zhì)的實驗方法。這項技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用場景，以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域： 1. 蛋白質(zhì)相互作用分析：通過免疫沉淀技術(shù)，研究人員可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，揭示蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成以及它們在細胞內(nèi)的功能和調(diào)控機制。 2. 抗體藥物開發(fā)：免疫沉淀技術(shù)可以用于研究抗體藥物與其靶標蛋白的結(jié)合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性，指導(dǎo)抗體藥物的設(shè)計和優(yōu)化。 3. 蛋白質(zhì)表達水平分析：通過比較不同條件下的免疫沉淀結(jié)果，可以評估目標蛋白的相對量，進...

ChIP技術(shù)的應(yīng)用： 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究DNA甲基化對基因表達的影響。 4. 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能：研究染色質(zhì)重塑對基因表達和細胞功能的影響。 5. 疾病相關(guān)基因的調(diào)控：研究疾病狀態(tài)下基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化。 ChIP技術(shù)是表觀遺傳學(xué)研究中的一個重要工具，它可以幫助科學(xué)家們理解基因表達是如何在分子水平上被精確調(diào)控的。 免疫沉淀技術(shù)IP的實驗方法。ChIP免疫沉淀 免...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種利用抗體與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，從復(fù)雜樣本中分離和純化目標蛋白質(zhì)的實驗方法。這項技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用場景，以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域： 1. 蛋白質(zhì)相互作用分析：通過免疫沉淀技術(shù)，研究人員可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，揭示蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成以及它們在細胞內(nèi)的功能和調(diào)控機制。 2. 抗體藥物開發(fā)：免疫沉淀技術(shù)可以用于研究抗體藥物與其靶標蛋白的結(jié)合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性，指導(dǎo)抗體藥物的設(shè)計和優(yōu)化。 3. 蛋白質(zhì)表達水平分析：通過比較不同條件下的免疫沉淀結(jié)果，可以評估目標蛋白的相對量，進...

真核生物的基因組 DNA 以染色質(zhì)（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白質(zhì)與 DNA 在染色質(zhì)環(huán)境中的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑，而染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術(shù)是目前公認的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達機制研究中不可或缺的技術(shù)之一。 它的基本原理是在活細胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA（染色質(zhì)）復(fù)合物，并將其切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法（抗體親和）沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA，通過對目的片段的純化與后期檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的...

真核生物的基因組 DNA 以染色質(zhì)（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白質(zhì)與 DNA 在染色質(zhì)環(huán)境中的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑，而染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術(shù)是目前公認的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達機制研究中不可或缺的技術(shù)之一。 它的基本原理是在活細胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA（染色質(zhì)）復(fù)合物，并將其切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法（抗體親和）沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA，通過對目的片段的純化與后期檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的...

免疫沉淀技術(shù)RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的實驗方法基于以下幾個關(guān)鍵步驟： 1. 細胞裂解：首先，細胞或組織樣本被裂解，以釋放細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和RNA復(fù)合物。 2.抗體特異性結(jié)合：裂解后的樣本中加入針對特定RNA結(jié)合蛋白的抗體。這些抗體能夠特異性地識別并結(jié)合到目標蛋白。 3. 免疫復(fù)合物形成：抗體與目標蛋白結(jié)合后，形成抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。 4. 親和介質(zhì)捕獲：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來捕獲這些抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合，從而拉下與之結(jié)合的復(fù)合物。 ...

ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）實驗是一種用于研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù)。以下是ChIP實驗的實驗設(shè)計概述： 1. 目標蛋白的選擇：確定您想要研究的目標蛋白，例如特定的轉(zhuǎn)錄因子或組蛋白修飾。 2. 樣本的準備：根據(jù)研究的需要選擇合適的細胞或組織樣本。 3. 抗體的選擇：選擇具有高特異性和親和力的抗體，這對于實驗的成功至關(guān)重要。 4. 交聯(lián)：使用甲醛等交聯(lián)劑將蛋白質(zhì)與DNA在體內(nèi)共價結(jié)合，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 5. 細胞裂解：裂解細胞以釋放染色質(zhì)，同時保持蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的完整性。 6. 染色質(zhì)的剪切：通過超聲或酶消化將染色質(zhì)剪切成適當大小...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實驗方法通常包括以下步驟： 1. 樣本準備 2. 蛋白質(zhì)濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。 3. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。 4. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標蛋白質(zhì)充分結(jié)合。 5. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。 6. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，...

ChIP技術(shù)的應(yīng)用： 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究DNA甲基化對基因表達的影響。 4. 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能：研究染色質(zhì)重塑對基因表達和細胞功能的影響。 5. 疾病相關(guān)基因的調(diào)控：研究疾病狀態(tài)下基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化。 ChIP技術(shù)是表觀遺傳學(xué)研究中的一個重要工具，它可以幫助科學(xué)家們理解基因表達是如何在分子水平上被精確調(diào)控的。 免疫沉淀技術(shù)ChIP的原理是什么？北京Co IP免...

Co-IP的實驗步驟： 1. 細胞裂解：首先，細胞或組織被裂解，釋放其中的蛋白質(zhì)。 2. 抗體結(jié)合：然后，將特異性抗體（針對已知蛋白質(zhì)之一的抗體）加入到裂解物中。這些抗體會特異性地結(jié)合到目標蛋白（誘餌蛋白）上。 3. 免疫復(fù)合物形成：抗體與目標蛋白結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物。 4. 沉淀：接著，使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來捕獲免疫復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合，從而拉下抗體以及與之結(jié)合的目標蛋白和任何相關(guān)的相互作用蛋白。 5. 洗滌：捕獲的免疫復(fù)合物被洗滌以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。 6. 洗脫和分析：免疫復(fù)合物被洗脫...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實驗方法通常包括以下步驟： 1. 樣本準備 2. 蛋白質(zhì)濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。 3. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。 4. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標蛋白質(zhì)充分結(jié)合。 5. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。 6. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，...

免疫沉淀（Co-IP）實驗中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。 1. 特異性：抗體應(yīng)當對目標蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 2. 親和力：抗體對目標蛋白的親和力要足夠高，以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標蛋白。 3. 抗體類型：單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實驗。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性，而多克隆抗體可能提供更強的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。 4. 應(yīng)用驗證：選擇已經(jīng)過免疫沉淀（Co-IP）或相關(guān)應(yīng)用（如Western blot, IHC）驗證的抗體，這增加了實驗成...

ChIP實驗的基本步驟包括： 1. 交聯(lián)（Crosslinking）：細胞被甲醛等交聯(lián)劑處理，使得蛋白質(zhì)和DNA之間的相互作用被固定，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 2. 細胞裂解：裂解細胞，釋放染色質(zhì)，同時保持蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的完整性。 3. 超聲或酶解：通過超聲或酶解將染色質(zhì)切割成較小的片段，以便于后續(xù)步驟中的免疫沉淀。 4. 免疫沉淀（Immunoprecipitation）：加入針對特定組蛋白修飾或轉(zhuǎn)錄因子的抗體，這些抗體會特異性地結(jié)合到目標蛋白質(zhì)上。 5. 捕獲復(fù)合物：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子捕獲抗體-蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 6. 洗...

ChIP技術(shù)的應(yīng)用： 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究DNA甲基化對基因表達的影響。 4. 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能：研究染色質(zhì)重塑對基因表達和細胞功能的影響。 5. 疾病相關(guān)基因的調(diào)控：研究疾病狀態(tài)下基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化。 ChIP技術(shù)是表觀遺傳學(xué)研究中的一個重要工具，它可以幫助科學(xué)家們理解基因表達是如何在分子水平上被精確調(diào)控的。 免疫沉淀技術(shù)IP的實驗設(shè)計。溫州IP免疫沉淀實驗視...

免疫共沉淀分析（Co-IP）實驗原理與IP十分類似，基本的技術(shù)都是采用目標抗原特異性的固相化抗體；但IP的目標是純化單一抗原，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。 在Co-IP實驗中，已知抗原稱為誘餌蛋白，與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等，蛋白間相互作用強度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間?；镜腃o-IP實驗方案與IP相同，實際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是，還有許多其他因素需要考慮，例如，結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化，優(yōu)化時，需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。 免疫沉淀技術(shù)Ch...

免疫共沉淀分析（Co-IP）實驗原理與IP十分類似，基本的技術(shù)都是采用目標抗原特異性的固相化抗體；但IP的目標是純化單一抗原，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。 在Co-IP實驗中，已知抗原稱為誘餌蛋白，與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等，蛋白間相互作用強度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間。基本的Co-IP實驗方案與IP相同，實際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是，還有許多其他因素需要考慮，例如，結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化，優(yōu)化時，需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。 免疫沉淀技術(shù)Co...

Co-IP（Co-Immunoprecipitation，共免疫沉淀）的實驗方法通常包括以下步驟： 1. 細胞培養(yǎng)與裂解：細胞在適宜的培養(yǎng)條件下生長到適當?shù)拿芏取? 蛋白質(zhì)分離：裂解后的細胞混合物通過離心去除未破碎的細胞碎片和未裂解的細胞。收集上清液 2. 抗體的添加：將特異性抗體（針對目標蛋白質(zhì)的抗體）加入到裂解物中。 3. 免疫復(fù)合物的形成：抗體與目標蛋白結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物。 4. 親和介質(zhì)的使用：向混合物中添加蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）。 5. 免疫復(fù)合物的捕獲：將混合物與珠子孵育一段時間后，使用磁鐵或離心的方法將珠子收集起來...

ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）實驗是一種用于研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù)。以下是ChIP實驗的實驗設(shè)計概述： 1. 目標蛋白的選擇：確定您想要研究的目標蛋白，例如特定的轉(zhuǎn)錄因子或組蛋白修飾。 2. 樣本的準備：根據(jù)研究的需要選擇合適的細胞或組織樣本。 3. 抗體的選擇：選擇具有高特異性和親和力的抗體，這對于實驗的成功至關(guān)重要。 4. 交聯(lián)：使用甲醛等交聯(lián)劑將蛋白質(zhì)與DNA在體內(nèi)共價結(jié)合，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 5. 細胞裂解：裂解細胞以釋放染色質(zhì)，同時保持蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的完整性。 6. 染色質(zhì)的剪切：通過超聲或酶消化將染色質(zhì)剪切成適當大小...

免疫沉淀純化所得抗原純度低一般有多種原因： 1. 非特異性蛋白污染 如果洗脫所得抗原純度較低，則有幾種方法可以進行優(yōu)化。在結(jié)合或洗滌緩沖液中加入去污劑或其他可以降低非特異性結(jié)合的組分。使用普通微珠預(yù)純化樣本還可以降低非目標分子的共純化。此外，還可以使用無關(guān)蛋白 (如BSA) 封閉微珠 。 2. 抗體污染 使用蛋白A、G或A/G的經(jīng)典免疫沉淀實驗中會出現(xiàn)抗體與抗原共洗脫的情況。如果共洗脫會影響下游分析，則需要使用抗體通過共價連接固定至微珠的方法進行實驗，如Pierce 直接 IP 或交聯(lián) IP 的形式。 免疫沉淀的原理是什么？深圳anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠...

ChIP技術(shù)的應(yīng)用： 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究DNA甲基化對基因表達的影響。 4. 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能：研究染色質(zhì)重塑對基因表達和細胞功能的影響。 5. 疾病相關(guān)基因的調(diào)控：研究疾病狀態(tài)下基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化。 ChIP技術(shù)是表觀遺傳學(xué)研究中的一個重要工具，它可以幫助科學(xué)家們理解基因表達是如何在分子水平上被精確調(diào)控的。 免疫沉淀技術(shù)的綜述。免疫沉淀實驗原理 免疫沉淀技...

Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，其應(yīng)用場景如下： 1. 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的鑒定：Co-IP可用于構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)目標蛋白的結(jié)合伙伴。 2. 信號傳導(dǎo)途徑的研究：通過Co-IP技術(shù)，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了許多關(guān)鍵的細胞信號通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等，為深入理解這些通路的功能和調(diào)控機制提供了重要線索。 3. 藥物靶點篩選：利用Co-IP技術(shù)，研究人員可以篩選潛在的藥物靶點。 疾病機制研究：通過分析疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的相互作用，Co-IP有助于揭示疾病的分子機制。 4. 抗體藥物開發(fā)：Co-IP可用于研究抗體藥物與其靶標...

ChIP技術(shù)的應(yīng)用： 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的鑒定：研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布：分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況，這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究：結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究DNA甲基化對基因表達的影響。 4. 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能：研究染色質(zhì)重塑對基因表達和細胞功能的影響。 5. 疾病相關(guān)基因的調(diào)控：研究疾病狀態(tài)下基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化。 ChIP技術(shù)是表觀遺傳學(xué)研究中的一個重要工具，它可以幫助科學(xué)家們理解基因表達是如何在分子水平上被精確調(diào)控的。 免疫沉淀技術(shù)IP實驗步驟。Protein AG免疫...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)復(fù)合物組成以及特定蛋白質(zhì)的表達和純化的實驗技術(shù)。 基本原理 免疫沉淀技術(shù)基于抗體與特定蛋白質(zhì)（抗原）之間的特異性相互作用。通過使用針對目標蛋白質(zhì)的特異性抗體，可以從含有多種蛋白質(zhì)的復(fù)雜樣本中捕獲并富集目標蛋白質(zhì)。 免疫沉淀技術(shù)有多種類型，包括： 1. 個別免疫沉淀法（Individual IP） 2. 免疫共沉淀法（Co-IP） 3. 染色質(zhì)免疫沉淀法（ChIP） 4. RNA免疫沉淀法（RIP） 近年來，免疫沉淀技術(shù)在固相支持物的選擇上有了很大...

ChIP實驗的基本步驟包括： 1. 交聯(lián)（Crosslinking）：細胞被甲醛等交聯(lián)劑處理，使得蛋白質(zhì)和DNA之間的相互作用被固定，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 2. 細胞裂解：裂解細胞，釋放染色質(zhì)，同時保持蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的完整性。 3. 超聲或酶解：通過超聲或酶解將染色質(zhì)切割成較小的片段，以便于后續(xù)步驟中的免疫沉淀。 4. 免疫沉淀（Immunoprecipitation）：加入針對特定組蛋白修飾或轉(zhuǎn)錄因子的抗體，這些抗體會特異性地結(jié)合到目標蛋白質(zhì)上。 5. 捕獲復(fù)合物：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子捕獲抗體-蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 6. 洗...

免疫沉淀純化所得抗原量低有多種原因， A. 純化所得抗原量低 1. 抗原結(jié)合水平低 IP 應(yīng)用中出現(xiàn)低抗原結(jié)合水平的可能原因有很多，結(jié)合反應(yīng)所使用的溶液是重要原因之一。必須使用適合的緩沖液，有特定的pH和鹽濃度，可能還需要添加互作所需的輔助因子。IP 或Co-IP 中用于純化的抗體是影響得率的另一個重要因素。如果抗體本身易失活或與抗原結(jié)合微弱，則可能很難找到足夠溫和的條件，即能產(chǎn)生結(jié)合，又能保證在孵育和洗滌過程中結(jié)合可以穩(wěn)定保持。 2. 抗原洗脫水平低 在某些情況下，抗原與抗體或結(jié)合蛋白結(jié)合之間可能會發(fā)生極強的相互作用，傳統(tǒng)的洗脫緩沖液無法將其破壞。如果需要使...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)復(fù)合物組成以及特定蛋白質(zhì)的表達和純化的實驗技術(shù)。 基本原理 免疫沉淀技術(shù)基于抗體與特定蛋白質(zhì)（抗原）之間的特異性相互作用。通過使用針對目標蛋白質(zhì)的特異性抗體，可以從含有多種蛋白質(zhì)的復(fù)雜樣本中捕獲并富集目標蛋白質(zhì)。 免疫沉淀技術(shù)有多種類型，包括： 1. 個別免疫沉淀法（Individual IP） 2. 免疫共沉淀法（Co-IP） 3. 染色質(zhì)免疫沉淀法（ChIP） 4. RNA免疫沉淀法（RIP） 近年來，免疫沉淀技術(shù)在固相支持物的選擇上有了很大...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實驗方法通常包括以下步驟： 1. 樣本準備 2. 蛋白質(zhì)濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。 3. 抗體預(yù)處理：如果使用預(yù)固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。 4. 免疫沉淀反應(yīng)：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標蛋白質(zhì)充分結(jié)合。 5. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結(jié)合的蛋白A或蛋白G結(jié)合的固相支持物。 6. 洗滌：去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，...

免疫沉淀（immunoprecipitation）是指利用抗體可與抗原特異性結(jié)合的特性，將抗原（常為靶蛋白）從混合體系沉淀下來，初步分離靶蛋白的一種方法。免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）是一種在體外探測兩個蛋白分子間是否存在特異性相互作用的一種方法。其原理非常簡單，如果兩個蛋白在體外體系能夠發(fā)生特異性相互作用的話，那么當用一種蛋白的抗體進行免疫沉淀時，另一個蛋白也會被同時沉淀下來。與酵母雙雜交技術(shù)不同，免疫共沉淀技術(shù)所利用的是抗原和抗體間的免疫反應(yīng)，是一種基于體外非細胞的環(huán)境中研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用的方法。 免疫沉淀IP抗體的選擇？北京RIP免疫沉淀磁...