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醫(yī)院檢驗(yàn)中心糖原染色操作規(guī)程:1.雪夫氏試劑:400m1蒸餾水煮沸除去C02,逐漸加堿性品紅2.08溶解后,待冷卻至60℃,加1mm01兒HCl40ml,再加偏重亞硫酸鈉(NaHSO:)4g,次日加活性碳1.5g,放置半天后過濾。配好后液體為無色透明,保存于4℃冰箱中。2.過碘酸作用液:過碘酸1g溶于蒸餾水100ml中,或取過碘酸鉀(1tI04)0。698加蒸餾水100ml,微加熱使溶解,再加濃硝酸0.3m1,置冰箱中保存。3.固定液:95%乙醇90ml與甲醛10m1混勻。4.20g/l甲基綠:甲基綠2g溶于100m1蒸餾水。[操作]_x005f_x005f_x005f_x000c_(1)新鮮或陳舊血片、骨髓片于固定液內(nèi)10分鐘。(2)水洗數(shù)次后,對(duì)照片先用唾液消化30分鐘,也可在同一片,在其中間用蠟筆劃界,一半做對(duì)照,另一半做測(cè)定。(3)水洗后,滴加過碘酸數(shù)滴于涂片上,作用10分鐘后,再水洗數(shù)次。多糖主要指糖原,它是一種膠樣液態(tài)存在于肝細(xì)胞、骨骼肌、心肌等處。江西如何使用糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)
臨床意義:1.急性白血病類型的鑒別紅白血病的幼紅細(xì)胞PAS染色多呈陽(yáng)性反應(yīng),陽(yáng)性率高,反應(yīng)強(qiáng);成熟紅細(xì)胞有時(shí)亦可為陽(yáng)性;急性淋巴細(xì)胞白血病的原、幼淋巴細(xì)胞PAS染色多為紅色顆?;驂K狀陽(yáng)性反應(yīng);急性粒細(xì)胞白血病的原粒細(xì)胞呈陰性或胞質(zhì)呈彌漫淡色陽(yáng)性反應(yīng);急性早幼粒細(xì)胞白血病異常早幼粒細(xì)胞的PAS染色為陽(yáng)性反應(yīng);急性單核細(xì)胞白血病原、幼單核細(xì)胞PAS染色陽(yáng)性反應(yīng)呈彌漫分布的紅色細(xì)顆粒,巨核細(xì)胞白血病原巨核細(xì)胞PAS染色呈陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng),表現(xiàn)為紅色顆?;驂K狀。2.各類貧血的鑒別MDS、缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血(曾稱地中海貧血)的幼紅細(xì)胞PAS染色多為陰性反應(yīng),有時(shí)可出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng);巨幼紅細(xì)胞貧血、溶血性貧血、再障的幼紅細(xì)胞PAS染色為陰性。如何使用糖原染色試劑盒報(bào)價(jià)在肝糖原染色中用10%甲醛液固定肝組織。
糖原染色的原理與操作方法是什么:(1)原理:過碘酸將血細(xì)胞內(nèi)的糖原氧化,生成醛基。醛基與雪夫液中的無色品紅結(jié)合,形成紫色化合物,定位于細(xì)胞質(zhì)中。(2)操作方法:干燥涂片,滴加甲醛固定液固定10分鐘,流水沖洗,晾干。滴加過碘酸溶液作用20分鐘,流水沖洗,晾干。滴加雪夫液作用60分鐘,流水沖洗,晾干。滴加甲基綠溶液復(fù)染10分鐘,流水沖洗,晾干鏡檢。細(xì)胞的組織化學(xué)方法,是研究細(xì)胞成分常用的方法之一。它是利用化學(xué)試劑與細(xì)胞內(nèi)的某些物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng),從而在細(xì)胞局部形成有色沉淀物,再通過顯微鏡對(duì)組織內(nèi)的生物化學(xué)成分進(jìn)行定性、定位、定量研究
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個(gè)方面:盡可能選取小塊新鮮組織及時(shí)固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前決不能用水或生理鹽水等浸洗。應(yīng)避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能較好地保存糖原,但有使糖原流動(dòng)到細(xì)胞一側(cè)的現(xiàn)象,多數(shù)人認(rèn)為是由于固定劑把細(xì)胞內(nèi)的糖原推向固定劑對(duì)組織浸透的方向而造成。其他組織應(yīng)用中性福爾馬林固定為佳。組織在4℃左右溫度內(nèi)固定與保存,是針對(duì)糖的性質(zhì)和避免糖原溶于水而采取的相應(yīng)措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此較好不單獨(dú)使用乙醇固定,以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳該依據(jù)切片厚薄、組織的類別等決定。
糖原及粘液染色法注意事項(xiàng):1、糖原的固定要及時(shí),而且標(biāo)本要新鮮。2、如用無水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病,因無水酒精滲透較慢,而且容易產(chǎn)生極化,(極化是糖原顆粒趨向于細(xì)胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果較佳,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各種試劑必須化學(xué)純,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,器皿必須潔凈而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏試劑,在經(jīng)過活性碳吸附漂白后不顯無色,首先應(yīng)考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,使用時(shí)可考慮適當(dāng)?shù)脑黾佑昧?。其次考慮堿性品紅本身,常常雖屬同一生產(chǎn)廠家,但不同批號(hào),其效果就可能不同,應(yīng)特別引起注意~冷凍切片染色效果不佳,成熟時(shí)間2個(gè)月,染色時(shí)間一般15-20分鐘。福建正規(guī)糖原染色試劑盒
切取的材料應(yīng)小而薄,便于固定液迅速滲入內(nèi)部。江西如何使用糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)
糖原染色:1、概況PAS染色法(PeriodicAcid-Schiffstain)在組織學(xué)上,主要用來檢測(cè)組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個(gè)碳上的羥基氧化成醛基,再用Schiff試劑和醛基反應(yīng)使呈現(xiàn)紫紅色。2、原理PAS染色又稱過碘酸雪夫染色,糖原染色。一般用來顯示糖元和其它多糖物質(zhì)。過碘酸能使細(xì)胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化成二醛,再與Schiff氏液的無色品紅結(jié)合,紅色,定位于胞漿上。3、應(yīng)用隨著醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展,糖原染色應(yīng)用的范圍更加普遍,如用以證明與鑒別細(xì)胞內(nèi)空泡狀的性質(zhì),心肌病變及其他心血管疾病的診斷,糖原累積病診斷和研究,糖尿病的診斷和研究,用于某些的診斷等。江西如何使用糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)