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細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率影響因素:1.細(xì)胞密度一般來說,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60%~80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率,過低或過高都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果。2.細(xì)胞生長狀態(tài)這點(diǎn)非常關(guān)鍵,很多時(shí)候傳代次數(shù)太少或者太多都將導(dǎo)致細(xì)胞對轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變。因此,為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性、降低細(xì)胞毒性,應(yīng)盡量使用適度傳代的細(xì)胞系,并在不同次實(shí)驗(yàn)時(shí)保持細(xì)胞傳代次數(shù)的一致性。3.細(xì)胞種類不同細(xì)胞種類的細(xì)胞在做轉(zhuǎn)染時(shí)所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的,不能一種體系用在所有類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。重慶細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷
影響轉(zhuǎn)染試驗(yàn)的因素:細(xì)胞狀態(tài)變化:(1)轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞不匹配細(xì)胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細(xì)胞,也不是傳代很多次的細(xì)胞。這是因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變,總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到對數(shù)生長期的細(xì)胞,細(xì)胞生長旺盛,較容易轉(zhuǎn)染。(2)把握時(shí)機(jī)沒錯(cuò)!轉(zhuǎn)染也有適當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī),相比較非分裂細(xì)胞——分裂細(xì)胞往往要比靜止細(xì)胞更易于攝取并表達(dá)外源DNA。因此對大多數(shù)轉(zhuǎn)染操作而言,細(xì)胞都在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在種板。同樣重要的是細(xì)胞在種板進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)不應(yīng)處于過度生長的狀態(tài),如細(xì)胞數(shù)量過多,互相疊加,營養(yǎng)物質(zhì)耗竭,代謝廢物積聚,轉(zhuǎn)染率低下也是很正常的!青島細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑生產(chǎn)廠家形成DNA脂復(fù)合物,也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附。
具有細(xì)胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡便、節(jié)省時(shí)間,只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡單稀釋,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可)。3.對于常用細(xì)胞無需進(jìn)行費(fèi)時(shí)費(fèi)力的優(yōu)化工作。X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑簡介:X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動(dòng)物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類真核細(xì)胞(包括昆蟲細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢:
轉(zhuǎn)染方式:細(xì)胞由帶負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成,這對大分子物質(zhì)來說是個(gè)不可透過的屏障,比如DNA和RNA的磷酸骨架,其也帶負(fù)電荷。為了使核酸穿過細(xì)胞膜,研究人員開發(fā)了多種技術(shù),大致分為三類:化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷。生物方法---利用基因工程細(xì)菌轉(zhuǎn)染非細(xì)菌基因到細(xì)胞中。物理方法---在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個(gè)瞬時(shí)的孔從而導(dǎo)入DNA。然而,沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn),理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇,理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率,低細(xì)胞毒性和對正常生理學(xué)的影響較小,并且易于使用和可重復(fù)性等特點(diǎn)。一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(很長轉(zhuǎn)染)。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染技術(shù)已成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中,其應(yīng)用越來越***。那么,羅氏都有哪些轉(zhuǎn)染試劑,其優(yōu)勢都有哪些?圖1.細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經(jīng)0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn)。表達(dá)水平與位臵無關(guān),不會(huì)受到周圍染色體元件的影響。金華細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買
能與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子包裹入內(nèi)。重慶細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷
細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)簡介:實(shí)驗(yàn)原理外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法:電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和細(xì)菌介導(dǎo)法。電擊法是在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入;磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞;細(xì)菌法是利用包裝了外源基因的細(xì)菌傳染細(xì)胞的方法使得其進(jìn)入細(xì)胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實(shí)驗(yàn)條件控制較嚴(yán)、難度較大;細(xì)菌法的前期準(zhǔn)備較復(fù)雜、而且可能對于細(xì)胞有較大影響;所以現(xiàn)在對于很多普通細(xì)胞系,一般的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法。重慶細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家直銷