細胞培養(yǎng)實驗室之無菌操作區(qū)
無菌操作室:無菌操作區(qū)只限于細胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域,比較好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。理想的無菌操作室應劃為三部分:
a)更衣室—供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b)緩沖間—位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境,同時可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
c)無菌操作間—直用于無菌操作、細胞培養(yǎng)。其大小要適當,且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;墻壁光滑無死角以便清潔和消毒。工作臺安置不應靠墻壁,臺面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。
無菌操作間的空氣消毒:
紫外線燈—產(chǎn)生臭氧,并且室內(nèi)溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康??諝膺^濾的恒溫恒濕裝置—比較好。
無臭氧紫外線消毒器電子消毒滅菌器-在高壓電場作用下,電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑,能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應,從而靠臭氧氣體彌漫性擴散達到殺菌之目的,消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30~40min即能自行還原成氧氣,空氣不留異味,消毒物體表面不留殘毒。 全自動細胞計數(shù)儀的缺點。微型細胞計數(shù)儀
細胞培養(yǎng)實驗室之凈化工作臺
凈化工作臺:操作簡單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺主要有兩種:a)側流式或稱垂直式b)外流式或稱水平層流式。
凈化工作臺工作原理(大致相同)——通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾,由離心風機壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區(qū),從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。
側流式工作臺—空氣凈化后的氣流由左或右側通過工作臺面流向對側,也有從上向下或從下向上流向對側,形成氣流屏障保持工作區(qū)無菌。工作臺結構為封閉式。
外流式(水平式)工作臺—凈化后的空氣面向操作者流動,因而外方氣流不致混入操作,但進行有害物質實驗操作則對操作者不利。工作臺結構為開放式(已少用)。 西藏細胞計數(shù)儀咨詢報價細胞計數(shù)儀如何購買?
購買的細胞死亡或細胞存活率不佳
研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。運輸過程對細胞有嚴重影響。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久。
細胞生長逐漸變慢是什么原因?
細胞增殖變慢有以下原因:1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細胞營養(yǎng)不良 4.細胞頻繁傳代 5.細胞狀態(tài)不佳或老化 6.細胞存在污染。
染色法鑒定機理
染色法分化學染色法和熒光染色法,根據(jù)染色機理的不同,染料或使死細胞著色,或使活細胞著色。死活細胞在生理機能和性質上的差異主要包括:
死活細胞細胞膜通透性的差異:
活細胞的細胞膜是一種選擇性膜,對細胞起保護和屏障作用,只允許物質選擇性的通過;而細胞死亡之后,細胞膜受損,通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質。
臺盼藍,又稱錐藍,是一種陰離子型染料,不能透過完整的細胞膜。所以經(jīng)臺盼藍染色后只能使死細胞著色,而活細胞不被著色 全自動細胞計數(shù)儀怎么檢測?
如何讓細胞計數(shù)更加準確
對于每種細胞計數(shù)方法,樣品表面必須是干凈的。任何污染都可能導致不準確的結果。對于人工細胞計數(shù),這包括移除和清潔玻璃蓋片,然后用70%乙醇然后用水清潔計數(shù)腔。當使用一次性塑料載玻片時,每個樣品都需要一個新的載玻片(如果載玻片有兩個分開的腔室,則需要一對樣品)。
加載樣本前需要旋渦震蕩
在裝載樣品之前立即進行漩渦震蕩處理,是確保被分析樣品具有代表性的重要步驟。
不同大小和類型的細胞將以不同的速率沉降和聚集。在加載樣品之前立即旋轉溶液會增加等分的概率,并準確地反映細胞培養(yǎng)的特性。 TANK細胞計數(shù)儀價格。江蘇特點細胞計數(shù)儀
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培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點,是污染嗎?
首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁,如果變渾濁,基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁:在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規(guī)則,是否運動,是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規(guī)則,做布朗運動,黑點可能是細胞碎片(可能是細胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的),也可能是血清反復凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的,也可能是細胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點大小一致,快速移動,很可能是細菌污染。 微型細胞計數(shù)儀
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