原代細胞培養(yǎng)后細胞會因生存空間不足或密度過大，營養(yǎng)障礙，影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細胞使得培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的比較大利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗。
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細胞內(nèi)有空泡，是否是正常現(xiàn)象?
部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個是正常現(xiàn)象。如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài);如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細胞代次較高，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。
細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因
很可能是培養(yǎng)體系不適合細胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度，對細胞有嚴(yán)重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞，傳代太稀;或者生長較快的細胞，傳代較密，細胞嚴(yán)重堆疊生長)。 北京發(fā)展細胞計數(shù)儀收費全自動細胞計數(shù)儀的原理。
細胞接種密度多少合適?
依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經(jīng)驗：一般倍增時間24 h內(nèi)的細胞，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時間24-48 h的細胞，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時間超過48h的細胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。
如何預(yù)防細胞培養(yǎng)中黑點的產(chǎn)生?
掌握細胞傳代的比較好時機，不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間，防止消化過度產(chǎn)生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到比較好;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。
傳統(tǒng)手動計數(shù)法
回答這個問題前，我們拿一個可以比較的對象，即原始的細胞計數(shù)及活率分析方法——1臺光學(xué)顯微鏡+血球計數(shù)板，待測的細胞懸液樣品被滴加在血球計數(shù)板上，通過肉眼人工計數(shù)統(tǒng)計細胞數(shù)量和計算細胞活率。
顯微鏡下我們可以看到血球計數(shù)板上4個區(qū)域，其中的活細胞和死細胞數(shù)目被分別統(tǒng)計。這個方法比較大的優(yōu)勢是整套設(shè)備很便宜，配套一塊血球計數(shù)板，以及自配的臺盼藍溶液即可開始整個實驗，所以使用成本會很低，比較適合高校研究所中用于學(xué)生的教學(xué)實驗。 根據(jù)臺盼藍原理開發(fā)的全自動細胞計數(shù)儀。
細胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總
一般拿到細胞后，應(yīng)該注意什么?
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各兩張)，排除細胞本身污染的情況。
何時須更換培養(yǎng)基?
視細胞生長密度而定，常規(guī)細胞2-3天更換培養(yǎng)基。
細胞何時進行傳代較好?
一般情況下細胞生長至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細胞，在匯合前就必須進行傳代，這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代，否則會引起細胞分化。 全自動細胞計數(shù)儀的缺點。北京優(yōu)勢細胞計數(shù)儀銷售
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培養(yǎng)細胞時應(yīng)使用5%或10%CO2?
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3 - / CO32- / H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細胞。
CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?
定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。
希望能幫到大家。
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