細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)胞計(jì)數(shù)
細(xì)胞培養(yǎng)是指從動(dòng)物或植物中取出細(xì)胞,然后使其在合適的人工環(huán)境中生長。這些細(xì)胞可于培養(yǎng)前直接從組織中取出并采用酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離,或者也可來自已經(jīng)建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說,細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必不可少的過程,細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。
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二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎?
二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。
使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?
EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前,用EDTA清洗細(xì)胞,以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子。
可否使用與原先不同的培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),易造成細(xì)胞狀態(tài)不好,**終造成細(xì)胞無法存活。 北京新能源細(xì)胞計(jì)數(shù)儀TANK全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)格。
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室之無菌操作區(qū)
無菌操作室:無菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域,比較好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。理想的無菌操作室應(yīng)劃為三部分:
a)更衣室—供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b)緩沖間—位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無菌環(huán)境,同時(shí)可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
c)無菌操作間—直用于無菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。其大小要適當(dāng),且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;墻壁光滑無死角以便清潔和消毒。工作臺(tái)安置不應(yīng)靠墻壁,臺(tái)面要光滑壓塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。
無菌操作間的空氣消毒:
紫外線燈—產(chǎn)生臭氧,并且室內(nèi)溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康??諝膺^濾的恒溫恒濕裝置—比較好。
無臭氧紫外線消毒器電子消毒滅菌器-在高壓電場作用下,電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊,使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強(qiáng)氧化劑,能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng),從而靠臭氧氣體彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的,消毒時(shí)沒有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30~40min即能自行還原成氧氣,空氣不留異味,消毒物體表面不留殘毒。
細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總
一般拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?
收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各兩張),排除細(xì)胞本身污染的情況。
何時(shí)須更換培養(yǎng)基?
視細(xì)胞生長密度而定,常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。
細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?
一般情況下細(xì)胞生長至完全匯合后就應(yīng)該傳代,所有細(xì)胞生長都有一個(gè)要求不宜生長過密(也就是常說的長老了),但有接觸抑制的細(xì)胞,在匯合前就必須進(jìn)行傳代,這類細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代,否則會(huì)引起細(xì)胞分化。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀如何選擇?
傳統(tǒng)手動(dòng)計(jì)數(shù)法
回答這個(gè)問題前,我們拿一個(gè)可以比較的對(duì)象,即原始的細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析方法——1臺(tái)光學(xué)顯微鏡+血球計(jì)數(shù)板,待測的細(xì)胞懸液樣品被滴加在血球計(jì)數(shù)板上,通過肉眼人工計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量和計(jì)算細(xì)胞活率。
顯微鏡下我們可以看到血球計(jì)數(shù)板上4個(gè)區(qū)域,其中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目被分別統(tǒng)計(jì)。這個(gè)方法比較大的優(yōu)勢是整套設(shè)備很便宜,配套一塊血球計(jì)數(shù)板,以及自配的臺(tái)盼藍(lán)溶液即可開始整個(gè)實(shí)驗(yàn),所以使用成本會(huì)很低,比較適合高校研究所中用于學(xué)生的教學(xué)實(shí)驗(yàn)。 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的耗材貴嗎?臺(tái)州細(xì)胞計(jì)數(shù)儀廠家現(xiàn)貨
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所有和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物領(lǐng)域都需要進(jìn)行細(xì)胞濃度和活率的分析,不管是大學(xué)科研院所,還是各種大小規(guī)模的生物醫(yī)藥公司,細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析儀無疑已經(jīng)成為了細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)領(lǐng)域的一個(gè)基本配套的分析儀器。
對(duì)于這樣一個(gè)基礎(chǔ)的分析儀器,如果我們使用關(guān)鍵詞“細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析儀”,在百度上搜索可以得到巨量的結(jié)果,可以達(dá)到3450萬條相關(guān)結(jié)果。
那么在這茫茫的信息中,我們?nèi)绾蝸磉x擇一款適合自己的細(xì)胞計(jì)數(shù)及活率分析儀呢?
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