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染色法鑒定機理
染色法分化學染色法和熒光染色法,根據(jù)染色機理的不同,染料或使死細胞著色,或使活細胞著色。死活細胞在生理機能和性質上的差異主要包括:
死活細胞細胞膜通透性的差異:
活細胞的細胞膜是一種選擇性膜,對細胞起保護和屏障作用,只允許物質選擇性的通過;而細胞死亡之后,細胞膜受損,通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質。
臺盼藍,又稱錐藍,是一種陰離子型染料,不能透過完整的細胞膜。所以經(jīng)臺盼藍染色后只能使死細胞著色,而活細胞不被著色 全自動細胞計數(shù)儀的評價。河北細胞計數(shù)儀咨詢問價
生物科技界細胞計數(shù)三大派系
血球計數(shù)板派(你數(shù)派)
血球計數(shù)板派(你數(shù)派)一直秉承著“只要眼睛好,世界很美好”的宗旨,通?!澳銛?shù)派”師兄妹都是火眼金睛視力好,心無旁騖定力強,心算筆算能力強,實驗室的細胞計數(shù)活少,人力成本低,時間不值錢。血球計數(shù)板計數(shù)很容易受主觀影響,結果不準確,重復性也不好,每次計數(shù)結果都不一樣,不同師兄妹計數(shù)結果也不一樣!若是哪天有幾十個細胞樣本要計數(shù),那真是要讓人發(fā)瘋了!相信很多伙伴都是親身經(jīng)歷過的
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實驗中測試速度和操作便捷性
在生物制藥公司工作的研發(fā)人員,每天都有忙不完的工作,如何提高她們的工作效率?特別是像細胞計數(shù)及活率分析這種比較消耗時間的工作,如何讓我們寶貴的實驗人員從這個工作中解脫出來?而基本的要求所用的細胞計數(shù)和活率分析儀,不僅測試速度要快,而且簡單易操作。對于測試速度快直接反映為檢測時間要短,另一個則是測試的時間不影響我其他的工作,可以實現(xiàn)不間斷連續(xù)測樣,無需實驗人員在旁操作等待。
懸浮性細胞應如何傳代處理?
一般*需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,將細胞懸液移入離心管中,1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清,細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長,此時細胞生長狀態(tài)良好,當補液時,需避免反復吹打。
如何區(qū)分活細胞和死細胞?
顯微鏡下觀察:活細胞中間透亮,飽滿,有光澤,死細胞較暗。也可以通過臺盼藍染色來計算細胞活力。 細胞計數(shù)儀如何購買?
細胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總
一般拿到細胞后,應該注意什么?
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各兩張),排除細胞本身污染的情況。
何時須更換培養(yǎng)基?
視細胞生長密度而定,常規(guī)細胞2-3天更換培養(yǎng)基。
細胞何時進行傳代較好?
一般情況下細胞生長至完全匯合后就應該傳代,所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了),但有接觸抑制的細胞,在匯合前就必須進行傳代,這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代,否則會引起細胞分化。 細胞計數(shù)儀對比血球計數(shù)板。河北特點細胞計數(shù)儀銷售電話
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臺盼藍染液是細胞活性染料,常用于檢測細胞膜的完整性。細胞損傷或死亡時,臺盼藍可穿透變性的細胞膜,與解體的DNA結合,使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內。故可以檢測細胞是否存活。
臺盼藍染色法的原理正常的活細胞,胞膜結構完整,能夠排斥臺盼藍,使之不能夠進入胞內;而喪失活性或細胞膜不完整的細胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失,即可認為細胞已經(jīng)死亡,這與中性紅作用相反。因此,借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養(yǎng)中常用的死細胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現(xiàn)象。臺盼藍染色后,通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù),就可以對細胞存活率進行比較精確的定量。 河北細胞計數(shù)儀咨詢問價
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