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培養(yǎng)的細(xì)胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長(zhǎng)良好,所以要精細(xì)細(xì)胞計(jì)數(shù),在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞,總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力,用臺(tái)盼蘭染細(xì)胞,死細(xì)胞著色,活細(xì)胞不著色,從而可以區(qū)分死細(xì)胞與活細(xì)胞。所以在細(xì)胞生物學(xué)研究過(guò)程中,細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞活率測(cè)定是非常重要的工作,血球計(jì)數(shù)板消耗了研究者大量時(shí)間與體力,且結(jié)果也不能得到保證,重復(fù)性差。
而全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀擺脫了手工計(jì)數(shù)細(xì)胞的苦差和煩惱,同時(shí)結(jié)果更加準(zhǔn)確客觀,操作快速簡(jiǎn)便,重復(fù)性好,尤其為我們科研工作者節(jié)省了寶貴的時(shí)間,使研究者把更多的精力放在更重要的工作上。 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的檢測(cè)結(jié)果可靠嗎?北京通用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀銷售
單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)的第一步是單細(xì)胞懸液的制備,而懸液制備中細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性直接影響單細(xì)胞測(cè)序的數(shù)據(jù)質(zhì)量,但是關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)您真的了解嗎?
目前細(xì)胞計(jì)數(shù)主要使用臺(tái)盼藍(lán)染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1)臺(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不著色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色(藍(lán)色)。
2)雙熒光AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)可以通過(guò)完整的細(xì)胞膜,嵌入所有細(xì)胞(活細(xì)胞和死細(xì)胞)的細(xì)胞核,呈現(xiàn)綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過(guò)不完整的細(xì)胞膜,即死細(xì)胞的細(xì)胞膜,嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核,呈現(xiàn)紅色熒光。
拓開(kāi)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,擁有自動(dòng)化,合規(guī)化,高通量等優(yōu)勢(shì),能夠幫助您在實(shí)驗(yàn)室里高效率,高標(biāo)準(zhǔn)的完成細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞檢測(cè)等工作,是您細(xì)胞科研領(lǐng)域的強(qiáng)力伙伴。 湖北定制細(xì)胞計(jì)數(shù)儀銷售電話細(xì)胞計(jì)數(shù)儀有那些廠商?
細(xì)胞離心下來(lái)的離心速率應(yīng)為多少?
細(xì)胞傳代或凍存時(shí)欲回收細(xì)胞,其離心速度一般為800-1000 rpm/min,室溫離心5-8分鐘,轉(zhuǎn)速過(guò)高,將造成細(xì)胞破裂死亡。
如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞?
用無(wú)血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200~2000 個(gè)/毫升,在0.1 毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺(tái)盼蘭溶液。輕輕混勻,用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞?;罴?xì)胞排斥臺(tái)盼蘭,因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞,注意計(jì)數(shù)需在加入臺(tái)盼藍(lán)10min內(nèi)完成。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的,可直接用計(jì)數(shù)儀進(jìn)行。
細(xì)胞活力鑒定——臺(tái)盼藍(lán)染色法
臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue),也稱二胺藍(lán)(Diamine Blue)和加拉藍(lán)(Niagra Blue),是一種用于選擇性著色死細(xì)胞和即將死亡的細(xì)胞的重要染料。這種染料不能進(jìn)入細(xì)胞膜完整的細(xì)胞,而能在細(xì)胞膜受損的死細(xì)胞或即將死亡的細(xì)胞內(nèi)迅速積累,從而在顯微鏡下顯出藍(lán)色。若染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng),臺(tái)盼藍(lán)可能通過(guò)胞吞或胞飲作用進(jìn)入細(xì)胞。
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貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶?
一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過(guò)高時(shí),易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多,黑渣子增多,常規(guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化,對(duì)于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化,細(xì)胞密度過(guò)高超過(guò)80%時(shí),采用分步消化法。胰酶儲(chǔ)存在–20°C,解凍在4°C進(jìn)行,開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中,保存于–20°C,避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低,并可減少污染之機(jī)會(huì)。 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀使用范圍。四川通用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀價(jià)格走勢(shì)
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一般拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?
收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各兩張),排除細(xì)胞本身污染的情況。
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