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單細胞測序實驗的第一步是單細胞懸液的制備,而懸液制備中細胞計數(shù)的準確性直接影響單細胞測序的數(shù)據(jù)質量,但是關于細胞計數(shù)您真的了解嗎?
目前細胞計數(shù)主要使用臺盼藍染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1)臺盼藍染色原理:臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色。而死細胞的細胞膜透性增高,可使染料進入細胞內而使細胞著色(藍色)。
2)雙熒光AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)可以通過完整的細胞膜,嵌入所有細胞(活細胞和死細胞)的細胞核,呈現(xiàn)綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過不完整的細胞膜,即死細胞的細胞膜,嵌入所有死細胞的細胞核,呈現(xiàn)紅色熒光。
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二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎?
二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。
使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?
EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,用EDTA清洗細胞,以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。
可否使用與原先不同的培養(yǎng)基?
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,易造成細胞狀態(tài)不好,**終造成細胞無法存活。 鎮(zhèn)江細胞計數(shù)儀哪家便宜細胞計數(shù)儀起到什么作用?
給大家分享一下細胞手工計數(shù)的基本原理和需要注意的幾點操作細節(jié)。
血球計數(shù)板結構細胞手工計數(shù)板主要是血球計數(shù)板,市面上賣的一般都是有醫(yī)療器械號(國產(chǎn)進口均可用,不用挑哈)。血球計數(shù)板是一塊比普通載玻片厚的長方形玻片,在中部1/3面積區(qū)域有4條凹槽,將中部區(qū)域分為3個長方形平臺;其中正中間的平臺又被一短橫凹槽分隔為兩半,作為兩個計數(shù)池,兩個計數(shù)池平臺高度比兩邊略低0.1mm。
在顯微鏡下,每一個計數(shù)池均可以看見以下網(wǎng)狀結構,9個同面積的大方格組成方格網(wǎng),大方格作為計數(shù)室(綠色和藍色方框區(qū)域)。計數(shù)室邊長為1mm,蓋上蓋玻片后容積為:1mm(長)x1mm(寬)x0.1mm(高)=0.1mm3,即一個計數(shù)室的體積為0.1mm3,也就是1x10-4mL。我們只要把這個計數(shù)室里面的細胞數(shù)清楚,再乘以104,我們就可以得到每毫升樣本中的細胞個數(shù)。
細胞活力鑒定——臺盼藍染色法
臺盼藍(Trypan Blue),也稱二胺藍(Diamine Blue)和加拉藍(Niagra Blue),是一種用于選擇性著色死細胞和即將死亡的細胞的重要染料。這種染料不能進入細胞膜完整的細胞,而能在細胞膜受損的死細胞或即將死亡的細胞內迅速積累,從而在顯微鏡下顯出藍色。若染色時間過長,臺盼藍可能通過胞吞或胞飲作用進入細胞。
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培養(yǎng)的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好,所以要精細細胞計數(shù),在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞,總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力,用臺盼蘭染細胞,死細胞著色,活細胞不著色,從而可以區(qū)分死細胞與活細胞。所以在細胞生物學研究過程中,細胞計數(shù)和細胞活率測定是非常重要的工作,血球計數(shù)板消耗了研究者大量時間與體力,且結果也不能得到保證,重復性差。
而全自動細胞計數(shù)儀擺脫了手工計數(shù)細胞的苦差和煩惱,同時結果更加準確客觀,操作快速簡便,重復性好,尤其為我們科研工作者節(jié)省了寶貴的時間,使研究者把更多的精力放在更重要的工作上。 全自動細胞計數(shù)儀怎么使用?湖南機械細胞計數(shù)儀
全自動細胞計數(shù)儀的缺點。浙江自動化細胞計數(shù)儀代理商
在各種細胞計數(shù)和活率分析方法中,臺盼藍染色細胞計數(shù)無疑是細胞活率分析的金標準。目前,通過臺盼藍染色分析細胞活率的方法包括:傳統(tǒng)的光學顯微鏡+血球計數(shù)板法,也有市場上很普遍的插片式半自動細胞計數(shù)儀,以及無需手動混勻和染色的全自動細胞計數(shù)和活率分析儀。
其中,后兩個分析儀器的出現(xiàn),不僅很大程度地解放了人力,同時相比于顯微鏡+血球計數(shù)板法會更省時,更合規(guī),所以被各大制藥企業(yè)所使用。而全自動細胞計數(shù)和活率分析儀更是在工藝開發(fā)和生產(chǎn)質控方面表現(xiàn)出特有的優(yōu)勢,即減少了人為的操作誤差和提高了儀器間數(shù)據(jù)的一致性而廣受歡迎。 浙江自動化細胞計數(shù)儀代理商
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