眾所周知,活細胞密度(VCD)和活率(viability)是評估哺乳動物細胞系生長狀態(tài)的重要指標。生物制藥研發(fā)人員進行懸浮細胞培養(yǎng),每天所不能避免的工作,就是取樣計數(shù)。使用細胞計數(shù)板進行人工計數(shù)無疑是金標準方法。
但這個傳統(tǒng)方法其勞動強度十分驚人,樣品量少的時候還能吃得消,樣品量大一些,甚至于要做大規(guī)模的DOE實驗時,估計很多實驗人員想死的心都會有。而且人工計數(shù)有較強的主觀性,對操作人員的經(jīng)驗及操作熟練度有一定要求,導致有時候數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性和可比性會受到質疑。
拓開細胞計數(shù)儀,擁有自動化,合規(guī)化,高通量等優(yōu)勢,能夠幫助您在實驗室里高效率,高標準的完成細胞計數(shù)和細胞檢測等工作,是您細胞科研領域的強力伙伴。 TANK細胞計數(shù)儀官網(wǎng)。寧波機械細胞計數(shù)儀
臺盼藍染液是細胞活性染料,常用于檢測細胞膜的完整性。細胞損傷或死亡時,臺盼藍可穿透變性的細胞膜,與解體的DNA結合,使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內。故可以檢測細胞是否存活。
臺盼藍染色法的原理正常的活細胞,胞膜結構完整,能夠排斥臺盼藍,使之不能夠進入胞內;而喪失活性或細胞膜不完整的細胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失,即可認為細胞已經(jīng)死亡,這與中性紅作用相反。因此,借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養(yǎng)中常用的死細胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現(xiàn)象。臺盼藍染色后,通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù),就可以對細胞存活率進行比較精確的定量。 機械細胞計數(shù)儀銷售細胞計數(shù)儀的耗材貴嗎?
細胞抱團怎么處理?
一些懸浮細胞抱團生長是正?,F(xiàn)象,大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下,很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象,聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物,殃及周圍的懸浮細胞,因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團,可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團,也可以嘗試一下方法:將細胞懸液收集到15 ml離心管中,靜置20 min左右,小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團,需要大家酌情而定)。
實驗中操作和分析軟件的合規(guī)性
合規(guī)性還是針對于質控(QC)部門、GMP實驗室和生產(chǎn)車間。因為生產(chǎn)的藥物,各個國家對藥物生產(chǎn)都有嚴格的法規(guī)要求,包括GMP和FDA等,要求所測試的數(shù)據(jù)是可追蹤的,使用儀器的分析軟件有多級用戶權限管理和審計追蹤、電子簽名功能(,以保證測試數(shù)據(jù)的完整性、安全性和可靠性。
除此之外,大家還需要結合自己的預算,每天要測試的樣品數(shù)量,實驗室可放置儀器的空間大小等其他各個方面綜合起來考慮,終選擇一款合適的細胞計數(shù)和活率分析儀。 細胞計數(shù)儀的實用性強嗎?
培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2?
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3 - / CO32- / H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時,細胞培養(yǎng)時應使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時,則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。
CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?
定期(每周一次)更換水盤里面的水,水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子,水盤中可添加1%硫酸銅以預防霉菌污染。
希望能幫到大家。
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黑點已經(jīng)產(chǎn)生了,如何進行處理?
如果判定黑點是污染,請及時將細胞處理后丟棄。其他情況,可參照以下進行:如果是懸浮細胞:收集細胞上清慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細胞:將細胞用PBS洗2-3遍,洗的時候,輕輕拍打培養(yǎng)瓶,讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落,再棄去PBS,消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來,去掉低濃度胰酶,然后正常消化細胞,將收集的細胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶,并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養(yǎng)。 寧波機械細胞計數(shù)儀
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