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天然培養(yǎng)基的血清種類:牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)很高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分很少。血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、、無機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。制備培養(yǎng)基的操作要點(diǎn):易于控制微生物的生長(zhǎng)代謝狀態(tài)。海南瓊脂培養(yǎng)基 培養(yǎng)基制備器
微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基制備的要點(diǎn):對(duì)LST培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),發(fā)酵管內(nèi)可能存在氣泡。為了防止發(fā)酵管內(nèi)形成氣泡,可以采取以下措施:倒置的小管充滿培養(yǎng)基,不留氣泡,然后加入含有LST的試管中。在關(guān)閉殺菌鍋的排氣閥之前,將鍋內(nèi)的氣體排空。試管塞不要塞得太緊。使用硅膠塞時(shí),請(qǐng)勿使用橡膠塞。不可過早打開殺菌鍋,等殺菌鍋內(nèi)的氣壓和溫度降到與室溫相同或相差不大時(shí)再打開殺菌鍋。如果按照以上方法操作還有氣泡,可以用水作為培養(yǎng)基組的對(duì)照試驗(yàn)。如果培養(yǎng)基組有氣泡,對(duì)照組沒有氣泡,可以確定培養(yǎng)基本身原因。海南瓊脂培養(yǎng)基 培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基制備器內(nèi)部的管道和容器可以更換,方便移除和清洗。
制備培養(yǎng)基的操作要點(diǎn):用過的玻璃器皿:凡確無病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用后可隨時(shí)沖洗,吸取過化學(xué)試劑的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定數(shù)量后再集中進(jìn)行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必須經(jīng)過適當(dāng)消毒后,將污垢除去,用皂液洗刷,再用流水沖洗干凈。若用皂液未能洗凈的器皿,可用洗液浸泡適當(dāng)時(shí)間后再用清水洗凈。洗液的主要成份是重鉻酸鉀和濃流酸,其作用是將有機(jī)物氧化成可溶性物質(zhì),以便沖洗。洗液有很強(qiáng)的腐蝕作用,使用時(shí)應(yīng)特別小心,避免濺到衣服、身體和其他物品上。
培養(yǎng)基的配制:1、配料:在容器中加入少量水,按照配方稱取各種藥品,加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。2、溶解:淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3、調(diào)PH:用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。4、過濾:濾紙或棉花進(jìn)行過濾。5、分裝:一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。(1)三角瓶:若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,較多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。(2)試管分裝:液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度。固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。6、包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。7、滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。培養(yǎng)基制備器分裝好的培養(yǎng)基應(yīng)立即進(jìn)行滅菌。
血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理:血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但好普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成的,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物并不影響血清本身的質(zhì)量。若想去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。何謂熱滅活:一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因?yàn)榇思訜岵襟E可以使補(bǔ)體去活化,而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性,平滑肌的收縮,肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,增強(qiáng)吞噬作用,淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和啟動(dòng)。培養(yǎng)基制備器運(yùn)行過程順滑無聲;大程度的削減了噪音。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器售后
全自動(dòng)培養(yǎng)基制備分裝系統(tǒng):兩個(gè)存儲(chǔ)器;存儲(chǔ)器高度可選。海南瓊脂培養(yǎng)基 培養(yǎng)基制備器
干粉培養(yǎng)基有哪些注意事項(xiàng):①熔化培養(yǎng)基制備必須在玻璃容器中進(jìn)行,如果使用銅或鐵器皿,會(huì)影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。②注意按照先加水再加顆粒干粉培養(yǎng)基順序,反之則不利于培養(yǎng)基溶解。③單在必要時(shí)進(jìn)行加熱溶解操作,其加熱溫度也不要過高時(shí)間不要過長(zhǎng),主要原因是高溫會(huì)破壞瓊脂和培養(yǎng)基中的一些營(yíng)養(yǎng)成分。④生產(chǎn)的干粉培養(yǎng)基和顆粒培養(yǎng)基都經(jīng)過pH校準(zhǔn),使用時(shí)無需特殊驗(yàn)證。因?yàn)楦邏簳?huì)影響pH值,則應(yīng)在高壓后驗(yàn)證pH值。⑤液體培養(yǎng)基通常是預(yù)先包裝好的,分裝時(shí)應(yīng)注意每管的用量不得高于試管的三分之二。⑥高壓后冷卻至五六十度環(huán)境,再導(dǎo)入平板,否則會(huì)形成更多的水蒸氣,導(dǎo)致細(xì)菌分離數(shù)量。海南瓊脂培養(yǎng)基 培養(yǎng)基制備器