在制備培養(yǎng)基時,通常要考慮以下因素:(1)pH值多數(shù)細胞系在pH=7.4下生長得很好。盡管各細胞株之間細胞生長*pH值變化很小,但一些正常的成纖維細胞系以pH=7.4~7.7,轉(zhuǎn)化細胞以pH=7.0~7.4更合適。據(jù)報道,上皮細胞以pH=5.5合適。為確定*佳pH值,做一個簡單的生長實驗或特殊功能分析酚紅常用作指示劑,pH=7.4呈紅色,pH=7.0變橙色,pH=6.5變黃色,而pH=7.6呈紅色中略帶藍色,pH=7.8呈紫色。由于對顏色的觀察有很大的主觀性,因而必須用無菌平衡鹽溶液和同樣濃度的酚紅配一套標準樣,放在與制備培養(yǎng)基相同的瓶子中。(2)緩沖能力碳算鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低、對培養(yǎng)物有營養(yǎng)作用,因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。(3)滲透壓多數(shù)培養(yǎng)細胞對滲透壓有很寬的耐受范圍,一般常用冰點降低或蒸汽壓升高測定。如果自己配培養(yǎng)基,可通過測定滲透壓防止稱量和稀釋等造成的誤差。培養(yǎng)基制備器各種工作模式預存五組分配參數(shù)。天津培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基中血清的質(zhì)量標準:血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi),取材過程應嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經(jīng)過嚴格的質(zhì)量鑒定。《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。對細胞有良好的支持繁殖作用。河南培養(yǎng)基制備器哪個品牌好培養(yǎng)基長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。
培養(yǎng)基制備的基本方法:1、培養(yǎng)基配方的選定:同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標準方法,應嚴格按其規(guī)定進行配制外,一般均應盡量收集有關資料,加以比較核對,再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。2、培養(yǎng)基的制備記錄:每次制備培養(yǎng)基均應有記錄,包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號,終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等,記錄應復制一份,原記錄保存?zhèn)洳?,復制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。
培養(yǎng)基的分裝:大批量配制時使用的自動分配器須經(jīng)校準和確認。每次使用前后,均要對分配器的管道系統(tǒng)進行沖洗,在分裝無菌培養(yǎng)基前,則要采用無菌硅膠管。固體培養(yǎng)基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中,高壓滅菌后根據(jù)需要分裝平皿或試管。平皿:傾注平皿,應在無菌室中放置3—4h,如用塑料平皿須在35℃培養(yǎng)箱中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發(fā)。斜面:制備低層斜面分裝于試管,約占容積1/5,滅菌后趁熱斜放在細玻璃棒和木桿上,使成斜度,分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養(yǎng)基,如沾有培養(yǎng)基應用布抹去,以避免污染。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:不會產(chǎn)生氣泡。
培養(yǎng)基pH值不在標準范圍內(nèi)的問題:出現(xiàn)此類情況有很多原因,生物大致分為①廠家質(zhì)量:出廠時pH不穩(wěn)定。②滅菌問題:是蒸壓過高或殺菌時間過長,導致葡萄糖焦化,因此,pH值降低。③存放周期:保存時間超過保質(zhì)期或結(jié)塊水的質(zhì)量有問題。④水質(zhì)問題:采用去離子水/蒸餾水/純凈水等,不要采用礦泉水和自來水。⑤存儲溫度:儲存溫度過高。⑥光線直射等六種原因,可逐一檢查排除解決問題。這樣的培養(yǎng)基稱之為鑒別培養(yǎng)基。例如用以檢查飲水和乳品中是否含有腸道致病菌的伊紅美藍培養(yǎng)基就是一種常用的鑒別性培養(yǎng)基。全自動培養(yǎng)基制備分裝系統(tǒng):鋁制表面光滑平坦;易于清潔,無孔隙和裂縫,以防培養(yǎng)基流進去。云南全自動培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器注意不要過度干燥。商品化的平板瓊脂培養(yǎng)基應按照廠商提供的說明使用。天津培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器
用過的玻璃器皿:凡確無病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用后可隨時沖洗,吸取過化學試劑的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定數(shù)量后再集中進行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必須經(jīng)過適當消毒后,將污垢除去,用皂液洗刷,再用流水沖洗干凈。若用皂液未能洗凈的器皿,可用洗液浸泡適當時間后再用清水洗凈。洗液的主要成份是重鉻酸鉀和濃流酸,其作用是將有機物氧化成可溶性物質(zhì),以便沖洗。洗液有很強的腐蝕作用,使用時應特別小心,避免濺到衣服、身體和其他物品上。天津培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器