培養(yǎng)基制備的基本方法:1.培養(yǎng)基配方的選定:同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外.一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料.加以比較核對。2、培養(yǎng)基的制備記錄,每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)推各稱,配方及其來源.和各種成份的牌號。較終pH值、消毒的溫度和時間制各的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份。3.培養(yǎng)基成分的稱取。培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂.較好一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號,并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。5、培養(yǎng)塞pH的初步調(diào)整培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正。制備培養(yǎng)基的操作要點:半固體培養(yǎng)基如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中,就制成了半固體培養(yǎng)基。湖南觸摸屏培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的儲存:干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處,培養(yǎng)基要避免陽光直射;未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的保存期限以廠家提供為準(zhǔn),培養(yǎng)基開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕,應(yīng)注意防潮并盡快用完。應(yīng)定期對儲存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查,如容器密閉性復(fù)查、一次開封日期、內(nèi)容物的感官檢查,如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。廣西實驗室培養(yǎng)基制備器調(diào)節(jié)氧化還原電位(Eh) 各種微生物對培養(yǎng)基的Eh要求不同。
培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長。好好使用不銹鋼鍋加熱溶化.也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動,以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化.迄至煮沸。如為瓊脂培養(yǎng)基,應(yīng)先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,較后必須加以補(bǔ)足。
培養(yǎng)基配制:配制用水,培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬歐姆,一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。培養(yǎng)基:培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2-7.4,若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。血清:培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無血清培養(yǎng)基。培養(yǎng)基制備器完全稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。
過濾:配成的培養(yǎng)基,若無特殊要求,可省略此步。若有沉淀或渾濁,需要澄清的,液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾。而固體培養(yǎng)基可用中間夾一薄層脫脂棉的雙層紗布過濾。如果過濾法還不能達(dá)到澄清的要求,則可用蛋清澄清法,即培養(yǎng)基加熱冷卻到50℃~60℃,裝入三角瓶內(nèi)(不超過容量的二分之一),按1000ml加入1個~2個雞蛋的蛋清,用力搖晃3min~5min,高壓蒸汽滅菌121℃、20min,取出趁熱過濾即可。擺斜面:裝在試管中的瓊脂培養(yǎng)基,在滅菌完成后,趁熱立即擺放在木棒(或玻璃棒)上,并完成適時地斜度,冷卻后,瓊脂凝固即成斜面。斜面長度不要超過試管的二分之一。培養(yǎng)基制備器具有液量分配,時間分配,復(fù)制分配三種工作模式。甘肅培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器
分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。湖南觸摸屏培養(yǎng)基制備器
分裝:配制好的培養(yǎng)基根據(jù)不同的用途分裝在三角瓶、試管等容器中,分裝試管,如果試管量很大,可用自動分液器。如果試管量少,可用漏斗分裝。分裝量不超過容器容積的三分之二。三角瓶以不超過容積的二分之一為宜;瓊脂斜面以不超過試管長度的五分之一為宜,滅菌后,擺成的斜面為培養(yǎng)基的三分之一、底層為三分之二的量為宜;半固體瓊脂分裝量為試管長度的的三分之一;用來接種或保菌的高層瓊脂,分裝量為試管長度的四分之一或三分之一,用來接種厭氧菌的要達(dá)到三分之二;瓊脂平板,內(nèi)徑90mm的以13ml~15ml為宜,內(nèi)徑70mm的平板為8ml~10ml,制成的瓊脂平板。湖南觸摸屏培養(yǎng)基制備器