培養(yǎng)基的制備原則和要求:培養(yǎng)基是根據(jù)各類微生物生長繁殖的需要,用人工方法把多種物質(zhì)混合而成的營養(yǎng)物。一般用來分離、培養(yǎng)菌類。常用的培養(yǎng)基有基礎(chǔ)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基和厭氧培養(yǎng)基。在制備培養(yǎng)基時,應(yīng)掌握如下原則和要求:(一)培養(yǎng)基必須含有細(xì)菌生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)。所用的化學(xué)藥品必須純凈,稱取的份量務(wù)必準(zhǔn)確。(二)培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細(xì)菌生長要求。按各種培養(yǎng)基要求準(zhǔn)確測定調(diào)節(jié)pH值。多數(shù)細(xì)菌生長的適宜pH值為7.2~7.6,呈弱堿性。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點(diǎn):保證細(xì)菌不被引入容器中。福建Systec培養(yǎng)基制備器
天然培養(yǎng)基中血清主要作用:對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用:有一些細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被較廣用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝中起重要作用,如SeO3、硒等。湖南不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。
固體斜面培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長。較好使用不銹鋼萵加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。如為瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,較后必須加以補(bǔ)足。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正:因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正。
培養(yǎng)基的質(zhì)量測試:每批培養(yǎng)基制備好以后,應(yīng)仔細(xì)檢查一遍,如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測定其較終pH.將全部培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)過夜,如發(fā)現(xiàn)有菌生長,即棄去。用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基,培養(yǎng)24~48小時,如無菌生長或生長不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次,如結(jié)果仍同前,則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去,不能使用。培養(yǎng)基的保存:培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處,較好能放于普通冰箱內(nèi)。放置時間不宜超過一周,傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過3天。每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標(biāo)簽。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點(diǎn):高質(zhì)量制備各種類型培養(yǎng)基。
制備培養(yǎng)基的操作要點(diǎn):a.液體培養(yǎng)基所配制的培養(yǎng)基是液態(tài)的,其中的成分基本上溶于水,沒有明顯的固形物,液體培養(yǎng)基營養(yǎng)成分分布均勻,易于控制微生物的生長代謝狀態(tài)。b.固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。常用作凝固劑的物質(zhì)有瓊脂、明膠、硅膠等,以瓊脂為常用。固體培養(yǎng)基在實(shí)際中用得十分普遍。在實(shí)驗(yàn)室中,它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗(yàn)雜菌、計(jì)數(shù)、保藏、生物測定等。c.半固體培養(yǎng)基如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中,就制成了半固體培養(yǎng)基。以瓊脂為例,它的用量在0.2~1%之間。這種培養(yǎng)基有時可用來觀察微生物的動力,有時用來保藏菌種。培養(yǎng)基制備器系統(tǒng)自動調(diào)整供給樣品劑量保證了重現(xiàn)性結(jié)果。福建Systec培養(yǎng)基制備器
調(diào)節(jié)氧化還原電位(Eh) 各種微生物對培養(yǎng)基的Eh要求不同。福建Systec培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:1.水:除特定要求,實(shí)驗(yàn)室用水的電導(dǎo)率在25℃下應(yīng)不高于25uS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4MΩcm)。微生物污染應(yīng)不超過103CFU/mL,較好低于102CFU/mL。應(yīng)根GB/T5750.12或其他有效方法,定期檢驗(yàn)微生物的污染。2.稱量和復(fù)水:稱量所需量的脫水培養(yǎng)基(注意防止吸入粉末,尤其是含有有害物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊)后再加水至所需的量。3.溶解和分裝:脫水培養(yǎng)基加水后適當(dāng)加熱,并不攪拌使其快速溶解,必要時,重新溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱溶解前應(yīng)浸泡幾分鐘。福建Systec培養(yǎng)基制備器